科研产出
重组酶辅助扩增结合CRISPR/Cas13a检测禽腺病毒4型方法的建立
《云南农业大学学报(自然科学版) 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立高效、灵敏、特异的禽腺病毒4型（fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4）检测方法。【方法】将重组酶辅助扩增技术（recombinase aided amplification,RAA）与规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白（clustered regularly interspaced short palindromic repeats associated protein 13a,CRISPR-Cas13a）技术相结合，针对FAdV-4 Hexon基因保守区设计RAA引物及CRISPR RNA （crRNA），利用RAA技术扩增样本核酸，并进行CRISPR-Cas13a荧光检测，以qPCR为对照方法，评价所建立方法的灵敏度、特异性以及与qPCR法的一致性。【结果】本研究所建立的方法反应过程均在37℃恒温条件下完成，反应体系可检测的最低扩增拷贝数为10~1 copies/μL，灵敏度高，且与FAdV-1、FAdV-7、FAdV-8b、FAdV-9、FAdV-10、鸡传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病毒、传染性支气管炎病毒、禽流感H9亚型疫苗和新城疫病毒等禽病原核酸检测无交叉反应。该方法检测30份临床样本与qPCR检测的阳性检出率一致。【结论】建立的RAA-Cas13a方法检测FAdV-4具有简便、灵敏、特异等特点，可用于FAdV-4的快速检测和流行病学监测。
关键词： 禽腺病毒4型 CRISPR/Cas13a 重组酶辅助扩增 检测
全文链接
请求原文
猪流行性腹泻病毒RAA-CRISPR/Cas13a检测方法的建立与初步应用
《畜牧兽医学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：将重组酶辅助扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)与规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白(CRISPR-Cas13a)技术相结合,即RAA-Cas13a,建议建立高效、灵敏、特异的猪流行性腹泻病毒(por-cine epidemic diarrhea virus,PEDV)检测方法.针对PEDV N基因保守区设计RAA特异性引物和CRISPR RNA(crRNA),利用RAA技术扩增样本核酸,并进行CRISPR-Cas13a荧光检测,以RT-qPCR为对照方法,评价该方法的灵敏度、特异性及与RT-qPCR法的一致性.结果表明,该方法最低可检测至101 copies·μL-1,且与猪圆环病毒1型、猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒及猪伪狂犬病病毒等常见猪源病原核酸检测无交叉反应.采用RAA-Cas13a检测40份临床样本与RT-qPCR方法阳性符合率为100%,阴性符合率为84.6%,总符合率为95%,Kappa值为0.881.本研究建立的RAA-Cas13a方法灵敏度高、特异性强,为PEDV的临床诊断和流行病学监测提供了可靠的技术手段.
关键词： 猪流行性腹泻病毒 CRISPR/Cas13a 重组酶辅助扩增 N基因 检测
全文链接
请求原文
基于深度学习的病虫害智能化识别系统
《中国植保导刊 》 2019 北大核心
摘要：我国农作物种植覆盖面广、分散度高,病虫害发生种类多、区域性发生规律复杂,传统的人工鉴定技术从效率、能力与精度方面均难以满足新形势下重大病虫测报要求。针对这一实践需求,以测报灯下害虫图像数据库(约18万张)、田间病虫害图像数据库(约32万张)为基础,构建了基于深度学习方法的病虫害种类特征自动学习、特征融合、识别和位置回归计算框架,并研发了移动式病虫害智能化感知设备和自动识别系统。通过近2年的精确度和实操运行效率检验,该系统在自然状态下对16种灯下常见害虫的识别率为66%～90%,对38种田间常见病虫害(症状)的识别率为50%～90%。随基础数据库的不断丰富、神经网络深层特征提取的不断完善,该系统有望进一步提高识别准确率,从而真正实现田间病虫害识别自动化、智能化和高效率。
全文链接
请求原文
猪流行性腹泻病毒检测技术研究进展
《安徽农业科学 》 2018
摘要：猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪急性高度接触性肠道传染病,主要临床症状表现为呕吐、水样腹泻、脱水等。近年来,PED在全球范围内暴发流行,使养猪业遭受巨大的经济损失。对猪流行性腹泻的检测方法(病毒的分离和鉴定、免疫电镜法、免疫学检测法、分子生物学检测等)进行了综述,以期对猪流行性腹泻病毒的防控提供理论依据。
全文链接
请求原文
猪流行性腹泻病毒检测技术研究进展
《安徽农业科学 》 2018
摘要：猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪急性高度接触性肠道传染病,主要临床症状表现为呕吐、水样腹泻、脱水等.近年来,PED在全球范围内暴发流行,使养猪业遭受巨大的经济损失.对猪流行性腹泻的检测方法(病毒的分离和鉴定、免疫电镜法、免疫学检测法、分子生物学检测等)进行了综述,以期对猪流行性腹泻病毒的防控提供理论依据.
全文链接
请求原文
消毒前后孵化室空气中沙门氏菌和大肠杆菌污染情况监测
《安徽农业科学 》 2017
摘要：[目的]通过对安徽某大型种鸡孵化场在消毒前后孵化室空气中沙门氏菌和大肠杆菌污染情况的监测,评估该孵化场的消毒程序、消毒剂选择和使用方法的可行性和实际效果。[方法]采用平板暴露自然沉降法,选用麦康凯培养基为选择性采样培养基,SS培养基为沙门氏菌的进一步鉴别培养基,对分离菌进行革兰氏染色、镜检,并对3种不同消毒剂消毒和未消毒时孵化室空气中的细菌数及孵化出雏时的健雏率进行比较。[结果]连续2 d未消毒,孵化室各功能区即可检测到沙门氏菌和大肠杆菌,且数量随未消毒时间的延长而增多;分别使用安立消、过氧乙酸、聚维酮碘3种消毒剂任一种连续消毒2 d后,孵化室空气中的沙门氏菌和大肠杆菌数量均降为0,健雏率较未消毒时明显提高。[结论]安立消、过氧乙酸、聚维酮碘3种消毒剂在选择正确的稀释浓度、消毒方法和消毒程序后,可以有效杀灭孵化室空气中的沙门氏菌和大肠杆菌,建议作为孵化室消毒的首选消毒剂交替选用。
全文链接
请求原文
