文献类型： 中文期刊
作者： 刘华 1 ; 殷冬冬 1 ; 邵颖 1 ; 宋祥军 1 ; 王振宇 1 ; 潘孝成 1 ; 涂健 1 ; 何长生 1 ; 朱良强 1 ; 祁克宗 1 ;
作者机构： 1.安徽农业大学;安徽省动物疫病预防与控制中心;安徽省农业科学院畜牧兽医研究所
关键词： 猪流行性腹泻病毒;CRISPR/Cas13a;重组酶辅助扩增;N基因;检测
期刊名称： 畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2023 年 54 卷 009 期
页码： 3991-3997
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 将重组酶辅助扩增技术(recombinase aided amplification,RAA)与规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白(CRISPR-Cas13a)技术相结合,即RAA-Cas13a,建议建立高效、灵敏、特异的猪流行性腹泻病毒(por-cine epidemic diarrhea virus,PEDV)检测方法.针对PEDV N基因保守区设计RAA特异性引物和CRISPR RNA(crRNA),利用RAA技术扩增样本核酸,并进行CRISPR-Cas13a荧光检测,以RT-qPCR为对照方法,评价该方法的灵敏度、特异性及与RT-qPCR法的一致性.结果表明,该方法最低可检测至101 copies·μL-1,且与猪圆环病毒1型、猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒及猪伪狂犬病病毒等常见猪源病原核酸检测无交叉反应.采用RAA-Cas13a检测40份临床样本与RT-qPCR方法阳性符合率为100%,阴性符合率为84.6%,总符合率为95%,Kappa值为0.881.本研究建立的RAA-Cas13a方法灵敏度高、特异性强,为PEDV的临床诊断和流行病学监测提供了可靠的技术手段.
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