文献类型： 中文期刊
作者： 殷冬冬 1 ; 郭浩 2 ; 兰梦蝶 3 ; 尹磊 1 ; 王洁茹 1 ; 沈学怀 1 ; 戴银 1 ; 潘孝成 1 ;
作者机构： 1.安徽省农业科学院畜牧兽医研究所
2.肥西县农业农村局动物卫生监督所
3.宁国市动物卫生监督所
关键词： 禽腺病毒4型;CRISPR/Cas13a;重组酶辅助扩增;检测
期刊名称： 云南农业大学学报(自然科学版)
ISSN： 1004-390X
年卷期： 2023 年 005 期
页码： 803-807
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 【目的】建立高效、灵敏、特异的禽腺病毒4型（fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4）检测方法。【方法】将重组酶辅助扩增技术（recombinase aided amplification,RAA）与规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白（clustered regularly interspaced short palindromic repeats associated protein 13a,CRISPR-Cas13a）技术相结合，针对FAdV-4 Hexon基因保守区设计RAA引物及CRISPR RNA （crRNA），利用RAA技术扩增样本核酸，并进行CRISPR-Cas13a荧光检测，以qPCR为对照方法，评价所建立方法的灵敏度、特异性以及与qPCR法的一致性。【结果】本研究所建立的方法反应过程均在37℃恒温条件下完成，反应体系可检测的最低扩增拷贝数为10~1 copies/μL，灵敏度高，且与FAdV-1、FAdV-7、FAdV-8b、FAdV-9、FAdV-10、鸡传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病毒、传染性支气管炎病毒、禽流感H9亚型疫苗和新城疫病毒等禽病原核酸检测无交叉反应。该方法检测30份临床样本与qPCR检测的阳性检出率一致。【结论】建立的RAA-Cas13a方法检测FAdV-4具有简便、灵敏、特异等特点，可用于FAdV-4的快速检测和流行病学监测。
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