科研产出
克氏原螯虾酚氧化酶原mRNA组织分布特性研究
《安徽农业大学学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：酚氧化酶原系统是甲壳动物体内与免疫相关的重要功能系统之一,对于甲壳动物的防御反应具有重要作用。本研究针对克氏原螯虾酚氧化酶原基因保守序列设计引物,利用实时荧光定量PCR法对克氏原螯虾酚氧化酶原mRNA的组织分布进行了初步研究。结果表明,克氏原螯虾酚氧化酶原基因在血淋巴、肝胰腺、卵巢和精巢中转录水平较高;在肌肉、表皮和鳃中有较弱表达;而在肠和胃中几乎无表达。此种组织表达特性可能与酚氧化酶原基因在机体生命活动过程中的功能有关。
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家蚕G蛋白α亚基基因BmGα12的克隆及序列分析与融合表达
《蚕业科学 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：异三聚体G蛋白是真核细胞感知外界信号后将信号传递到细胞内的重要分子,参与生物体内广泛的信号转导途径。采用生物信息学方法和RT-PCR、RACE技术克隆了家蚕G蛋白α亚基基因BmGα12的全长cDNA序列,该序列全长1374 bp,开放阅读框(ORF)1 128 bp,编码375个氨基酸。将构建的表达载体pET-41b(+)-Gα12转化E.coli BL21宿主菌进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot检测显示,BmGα12可在E.coli BL21中高效表达,GST-BmGα12融合蛋白主要以包涵体形式存在,其分子质量约71 kD。系统进化分析显示BmGα12与大鼠和人Gα12/Gα13的亲缘关系较近,初步推测BmGα12介导的信号传导同样在细胞生长、胚胎发育中起重要作用。
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家蚕G蛋白γ亚基BmGγ30A的克隆及其原核表达
《中国蚕业 》 2011
摘要：异三元G蛋白是真核细胞感知外界信号后将信号传递到胞内的重要分子,参与生物体广泛的信号转导。为了研究G蛋白在家蚕中的生理功能及其作用机理,运用生物信息学方法预测到家蚕Gγ的一段序列,通过设计特异性引物、PCR和RACE技术,克隆得到家蚕Gγ30A的序列。随后将该蛋白成熟肽cDNA片段通过酶切克隆至表达载体pET-41b(+),并导入E.coli BI21宿主菌中进行诱导表达。家蚕Gγ30A重组GST融合蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,在相对分子量约38 KDa处,出现特异性蛋白条带,表达方式分析发现融合蛋白在上清和包涵体中均有表达;试验结果说明我们已成功克隆到家蚕Gγ30A基因(GeneBank登录号:HQ699664),并在E.coli BL21中高效表达。
关键词： 家蚕 G蛋白γ亚基 克隆 BmGγ30A基因 原核表达
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家蚕抗菌肽基因Cecropin-D的克隆及其真核表达载体的构建
《北方蚕业 》 2010
摘要：从家蚕中提取总RNA,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,获得了家蚕Cecropin-D基因编码区的cDNA,扩增出家蚕抗茵肽Cecropin-D成熟肽基因片段,重组克隆入pMD18-Tvector载体,经DNA测序,该基因为186bp,编码62个氨基酸。用限制性内切酶切下目的基因,插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建真核表达栽体pPlC9K-CD。本实验的研究为获得超量表达的高活性表达抗菌肽Cecropin-D以及为研制具有抗菌活性的新型基因药物奠定了基础。
关键词： 家蚕 抗菌肽 Cecropin-D 克隆 表达栽体pPIC9K
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鸭Ⅰ型肝炎病毒VP1基因片段的克隆与表达载体的构建
《中国畜牧兽医 》 2010 北大核心
摘要：为研究鸭肝炎病毒VP1基因在大肠杆菌中的表达情况,根据鸭肝炎病毒核苷酸序列设计1对外引物和1对含有EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的内引物。以内外引物进行PCR扩增,将所得PCR产物回收,以相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET-32a后构建重组表达载体,并转入宿主菌BL21和Rosseta,经酶切、PCR和测序鉴定,证明VP1基因正确插入了表达载体。用不同浓度的IPTG诱导VP1基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,结果表明,VP1基因片段在大肠杆菌Rosseta和BL21中均难以表达。
关键词： 鸭肝炎病毒R85952株 VP1基因 克隆 表达
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茶蚕颗粒体病毒AcMNPVORF38同源基因的克隆及序列分析
《安徽农业科学 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：[目的]为利用昆虫病毒更好地防治害虫和进行分子生物学研究。[方法]从感病茶蚕幼虫的尸体中提取颗粒体病毒DNA后,进行酶切、克隆、测序和序列分析。[结果]成功克隆了茶蚕颗粒体病毒基因组中一个1 484 bp的片段。该片段含有1个完整的开放阅读框(ORF)和2个不完整ORF。完整ORF为666 bp,有典型Nudix结构域,其编码1个与苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒AcMNPV的ORF38高度同源的基因,定名为AcORF38同源基因。2个不完整ORF分别编码p47蛋白基因的C-端和p24基因的N-端。[结论]茶蚕颗粒体病毒与卷蛾科宿主中颗粒体病毒亲源关系较近,而与夜蛾科宿主昆虫中颗粒体病毒较远。AcORF38同源基因与编码NTP焦磷酸水解酶的基因高度同源,可能与病毒的复制和DNA损伤的修复过程相关,也可能与入侵寄主的过程相关。
关键词： 茶蚕 颗粒体病毒 AcMNPV-ORF38基因 克隆 序列分析
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蓖麻蚕线粒体cox2基因的克隆、序列测定和分子系统学分析
《蚕业科学 》 2004 北大核心 CSCD
摘要：利用兼并性引物克隆出蓖麻蚕线粒体cox2基因、tRNA Leu基因和cox1基因的部分片段。cox2基因编码框包含 6 85个核苷酸 ,编码 2 2 8个氨基酸的蛋白质 ;起始密码子为ATG ,终止密码子仅有 1个T组成 ;蓖麻蚕mtDNA的cox2基因中富含AT ,含量为 75 77% ,GC的含量为 2 4 2 3%。通过同源性比较 ,发现蓖麻蚕的cox2与柞蚕cox2同源性最高 ,核苷酸和氨基酸序列同源性分别是 89 0 %和 96 0 %。根据cox2氨基酸序列进行了 12种昆虫的分子系统学分析探讨。
关键词： 线粒体DNA 蓖麻蚕 cox2基因 基因克隆 序列测定 聚类分析
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烟实夜蛾性信息素合成激活肽基因的分子克隆
《昆虫学报 》 2000 北大核心
摘要：根据家蚕Bombyxmori和玉米夜蛾Helicoverpazea的性信息素合成激活肽基因序列 ,设计若干套引物 ,以烟实夜蛾Heliothisassulta基因组DNA为模板进行PCR扩增 ,得到 0 6 3kb的特异性DNA片段。该片段克隆进适当载体 ,序列测定和同源比较 ,查明烟实夜蛾的基因组中存在性信息素合成激活肽基因。烟实夜蛾的性信息素合成激活肽由 33个氨基酸组成 ,C末端是FXPRL结构 ,是目前发现的第 4种昆虫性信息素合成激活肽。在该神经肽第 14和第 15个氨基酸之间 ,插入一个 0 42kb的内含子。进一步的分析证明了烟实夜蛾的性信息素合成激活肽基因在潜成虫期的食道下神经节中表达
关键词： 性信息素合成激活肽 分子克隆 DNA测序 烟实夜蛾
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