科研产出
猪圆环病毒3型和4型TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法的建立
《安徽农业大学学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为了建立一种快速检测猪圆环病毒3型(PCV3)和4型(PCV4)的TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法,根据Gen Bank已登录的PCV3和PCV4基因保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,经优化各反应条件,构建标准曲线,分析其敏感性、特异性和重复性,并利用建立的荧光定量PCR方法对采自安徽省的临床样品进行检测,与普通PCR方法进行一致性评价.结果显示,PCV3的标准曲线为Y=–3.534 6 logX+41.11(R2=1.00),PCV4的标准曲线为Y=–3.382 5 logX+40.67(R2=1.00).PCV3和PCV4的检测限分别为49.5和27.1 copies·μL-1.对猪圆环病毒1型(PCV1)和2型(PCV2)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病毒(PRV)及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)无特异性扩增,组内和组间变异系数均<1%.临床样品检测结果显示,PCV3阳性检出率为40.8%,PCV4阳性检出率为20.4%,混合感染率为19.0%.建立了灵敏、特异,可同时快速、准确鉴别PCV3和PCV4的TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法,为PCV3和PCV4的检测和监测提供技术支撑.
关键词： 猪圆环病毒3型 猪圆环病毒4型 TAQMAN 实时荧光定量PCR
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土壤中烟草根黑腐病菌的real-time PCR分子检测
《中国烟草学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：根据烟草根黑腐菌与其它近缘真菌在ITS序列上的差异,设计PCR检测引物TbF/TbR,并通过对各菌株基因组DNA扩增验证其特异性;以接种10倍浓度梯度的根黑腐菌孢子的土壤DNA为模板,建立土壤烟草根黑腐菌real-time PCR检测的标准曲线,得出每个反应体系中分生孢子数目的对数(x)和对应的Ct值(y)之间呈线性关系:y=-1.5373x+24.955,R2=0.9909(P<0.01).通过对5块烟田土壤烟草根黑腐菌检测和烟田烟草根黑腐病的调查,证实上述方法可以准确检测土壤中烟草根黑腐菌孢子数量.
关键词： 烟草根黑腐病 rDNA-ITS real-time PCR
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皖系长毛兔不同周龄Wnt10b、SFRP2基因在皮肤中的表达规律
《中国畜牧杂志 》 2013 北大核心
摘要：本研究以被毛长度和被毛密度差异较大的皖系长毛兔(毛用型)和新西兰白兔(肉用型)为实验材料,采用Agilent公司家兔全基因组表达谱芯片筛选差异基因,根据芯片结果,挑出3个与家兔毛纤维生长发育相关的差异基因。实时荧光定量RT-PCR初步验证Wnt10b、Shh、SFRP2基因,检测结果与表达谱芯片结果一致。随后为研究差异表达基因在皖系长毛兔中的表达规律,分别选择一个上调基因(Wnt10b基因)和下调基因(SFRP2基因),采用实时荧光定量RT-PCR法研究Wnt10b、SFRP2基因在皖系长毛兔中的表达规律,进一步验证Wnt10b、SFRP2基因与家兔毛纤维生长发育相关。结果表明:Wnt10b基因在皖系长毛兔毛生长周期中起到一定的调节作用,能够通过诱发毛囊的再生而促进毛的生长发育;SFRP2基因在皖系长毛兔毛生长旺盛期表达量相对较低,在毛生长结束期表达量相对较高,因此SFRP2基因在皖系长毛兔毛生长周期中起到抑制毛生长的作用。
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J亚群禽白血病SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立
《中国预防兽医学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为建立一种能够快速、灵敏和特异地检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,本研究以ALV-J原型病毒株HPRS-103的pol基因3'端与gp85编码基因之间的保守区域(5 258 bp～5 802 bp)为检测目的片段,构建重组质粒并作为靶基因,通过对其浓度、引物浓度和退火温度的优化,建立了ALV-J SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。结果显示该方法的最低检测限度为2.36×102拷贝/μL,比普通PCR高100倍;与其他禽源病毒无交叉反应;批内和批间变异系数均小于5%。表明本研究建立的方法具有良好的特异性、稳定性和灵敏性。采用该方法对100只临床病鸡进行检测,ALV的检出率为44%。随机选择10只感染阳性鸡,检测病毒基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的分布与表达水平,结果表明ALV-J在各主要脏器中均有分布,但以肾脏中的病毒表达量最高。
关键词： J亚群禽白血病病毒 SYBR GreenⅠ 荧光定量PCR 病毒基因表达水平
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西花蓟马qRT-PCR与常规PCR快速检测比较
《植物检疫 》 2012 北大核心
摘要：西花蓟马是一种世界性害虫,其体型小、隐匿性强,因形态学鉴定必需成虫,存在不足。为此本研究以西花蓟马线粒体DNA的COI基因为模板,设计了1对引物,建立了西花蓟马qRT-PCR检测方法。该引物具有特异性,只有西花蓟马的荧光信号能被检测;检测灵敏度达到1/10000头成虫,靶标DNA片段的稀释限为11.63拷贝/μL,而常规PCR法的检测限点为1/120头成虫。该检测体系与常规PCR相比,灵敏度高、快速准确,对进出口检验检疫以及产品调运中入侵物种的检测具有重要意义。
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家蚕G蛋白a亚基基因BmGa73B原核表达及其表达条件优化
《中国蚕业 》 2012
摘要：通过RT.PCR技术从家蚕中扩增出G蛋白a亚基基因BmGa73B的cDNA,克隆至原核表达载体pET41b(+)中,所获得的重组质粒经酶切鉴定后,将其转化至EcoliBL21诱导表达,用SDS.PAGE与Westernblot对表达产物进行鉴定.结果表明,通过RT-PCR扩增获得长度为1158bp的蛋白基因,诱导表达重组质粒pET41b(+)-Ga73B,经SDS-PAGE检测,IPTGr的终浓度为1mmol/L时,诱导dh时蛋白表达量最高,出现分子质量约为73kD的目的蛋白带,与蛋白的理论值相符.经Westernblot检测,表达产物可与GST发生特异性反应.
关键词： G蛋白0a亚基 BmGa73B RT-PCR 克隆 原核表达
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家蚕G蛋白α亚基基因BmGα73B原核表达及其表达条件优化
《中国蚕业 》 2012
摘要：通过RT-PCR技术从家蚕中扩增出G蛋白α亚基基因BmGα73B的cDNA,克隆至原核表达载体pET-41b(+)中,所获得的重组质粒经酶切鉴定后,将其转化至E coli BL21诱导表达,用SDS-PAGE与Western blot对表达产物进行鉴定。结果表明,通过RT-PCR扩增获得长度为1 158 bp的蛋白基因,诱导表达重组质粒pET-41b(+)-Gα73B,经SDS-PAGE检测,IPTGr的终浓度为1 mmol/L时,诱导4 h时蛋白表达量最高,出现分子质量约为73 kD的目的蛋白带,与蛋白的理论值相符。经Western blot检测,表达产物可与GST发生特异性反应。
关键词： G蛋白α亚基 BmGα73B RT-PCR 克隆 原核表达
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利用Real-time RT-PCR法检测抗病毒活性物质对CMV复制的影响
《烟草科技 》 2011 北大核心
摘要：为准确检测经活性物质处理后的烟草体内病毒含量,建立了real-time RT-PCR检测体系。从烟田中分离到1株对CMV有拮抗作用的细菌B6,经分离纯化得到拮抗CMV的活性物质B6p,其分子量为40.6 kDa。利用叶圆片法,分析了活性物质处理后寄主体内病毒的复制特点,结果表明寄主体内的病毒复制作用受到了拮抗活性物质的抑制,并且随着拮抗活性物质浓度的增加病毒的复制作用减弱。
关键词： real-time RT-PCR 病毒 活性物质 CMV
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水稻根系不同强度干旱胁迫下5个基因表达分析
《华北农学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：通过不同浓度的PEG处理,模拟不同强度的干旱胁迫,研究水稻幼苗根系中5个基因的表达情况,结果表明:不同强度干旱胁迫下,根系中各基因表达也各不相同,但是在轻度干旱和中等干旱胁迫下,主要以下调为主,少数表达上调,严重干旱胁迫下情况比较复杂,有基因以上调为主的(抗坏血酸过氧化物酶4基因、核内小RNAZ274基因、甲酸四氢叶酸连接酶基因),也有基因以下调为主的(木聚糖酶抑制子蛋白1前体基因),还有基因以上调为主,但是上调倍数不大,下调倍数很大(酸性内切几丁质酶基因);5个基因表达的日变化表现出6种类型,每种类型的日表达都是上下波动的;抗旱品种的水稻根系对不同强度的干旱可能采取不同的应对策略,对轻度干旱和中等干旱可能是减少不必要的能量和物质消耗,过度干旱、严重干旱胁迫下才调动大量抗逆相关物质,抵抗干旱的伤害。
关键词： Real-time PCR 干旱胁迫 基因表达变化 根系
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