科研产出
猪流行性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
《养猪 》 2014
摘要：根据Gen Bank登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)毒株(登录号KJ960180)的M基因保守序列,设计1对扩增片段大小为299 bp的特异性引物,经PCR扩增、克隆、测序鉴定后,提取质粒作为阳性标准品,建立了PEDV的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法。该方法在1.21×103~1.21×108拷贝/μL范围内呈现良好的线性,相关系数(R2)为0.999,扩增效率为99%,扩增产物的熔解曲线为单个特异峰,产物Tm值为85.5~86℃,最低检测限为1.21×101拷贝/μL。本研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、重复性好、成本低且操作简单,适用于PEDV的早期诊断、定量研究和流行病学监测。
关键词： 猪流行性腹泻病毒 SYBR GreenⅠ 荧光定量RT-PCR
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鸡主要组织相容性复合体Ⅰβ微球蛋白(β2m)基因的克隆及序列分析
《中国畜牧兽医 》 2014 北大核心
摘要：为深入了解鸡主要组织相容性复合体Ⅰ(major histocompatibility complex classⅠ,MHCⅠ)β微球蛋白(β2m)分子的特征,研究β2m的免疫作用机理,试验通过RT-PCR技术获得了15条3个地方品种鸡完整的典型的MHCⅠβ2 m基因,将该序列与GenBank数据库中登录的鸭、人、鼠、鱼、猴、马和猪7个不同物种的MHCⅠβ2m分子序列进行了比对分析。结果显示,15条鸡β2m氨基酸序列同源性在98.0%~100%之间,大部分序列完全一致。鸡β2m氨基酸序列与鸭同源性最高,为60.6%;最低的则是来源于草鱼的β2m氨基酸序列,仅为33.3%。遗传进化分析进一步证实鸡与鸭的MHCⅠβ2m亲缘关系较近,与其他物种则遗传距离较远。此外,序列分析发现鸡β2 m基因高度保守,仅个别碱基发生突变。其成熟肽序列的第24和79位为半胱氨酸,在所比对的动物中均未发生突变;同时在成熟肽的第77~83位之间存在免疫球蛋白超基因家族的特征基序"YXCXVXH"。研究结果表明,鸡与其他物种的MHCⅠβ2m分子具有相同的免疫功能基本单位,同时又具备独特的结构特点。
关键词： 鸡主要组织相容性复合体 β微球蛋白基因 序列分析
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不同部位接种禽流感油乳剂灭活疫苗对笼养蛋鸡血清抗体和生产性能的影响
《中国家禽 》 2014 北大核心
摘要：为了解不同部位接种禽流感油乳剂灭活疫苗对笼养蛋鸡血清抗体和生产性能的影响,比较了笼养蛋鸡颈部皮下、颈背部皮下、胸部肌肉和腿部肌肉接种疫苗后,免疫鸡群的应激反应、局部病变发生情况、30 d内的产蛋性能变化以及免疫20、50、80 d时的血清H5、H9AIV HI抗体效价。结果表明,不同部位接种疫苗均可显著提高血清抗体水平,并产生程度不等的应激反应和局部病变;其中以腿部肌肉接种产生的血清抗体水平较高且相对稳定,应激反应和对产蛋性能的影响相对较小,并具有操作方便和无需辅助保定等优点,是笼养蛋鸡较为理想的禽流感油乳剂灭活疫苗免疫接种方式。
关键词： 禽流感油乳剂灭活疫苗 免疫部位 生产性能 抗体水平
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黄羽鸡J亚群禽白血病病毒的分离及gp85基因分析
《动物医学进展 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为了解禽白血病病毒在黄羽鸡中的流行情况,采用DF-1细胞接种、细胞培养上清P27抗原检测、PCR扩增,对送检疑似禽白血病的黄羽鸡病料进行了病毒分离,并对分离病毒gp85基因进行了测序和序列比较。结果表明,自黄羽鸡分离到2株J亚群禽白血病病毒(ALV-J),分别命名为AHaq01和AHaq02,它们之间的核苷酸序列同源性为93.8%,与ALV-J参考毒株序列同源性为91.1%~99.8%,其中与ALV-J原型毒株HPRS-103的序列同源性分别为93.3%和98.1%,与分离株AHaq01和AHaq02同源性最高的分别是WN100404(95.0%)和SD09TA04(99.8%)。进化分析进一步表明,2个分离株间的亲缘关系较远,为来源不同的ALV-J毒株。
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鸡传染性支气管炎LDT3-A株冻干苗对蛋种鸡的免疫效果观察
《中国畜牧兽医 》 2014 北大核心
摘要：本试验旨在对中国自主研发的LDT3-A株鸡传染性支气管炎冻干苗(简称LDT3-A株传支冻干苗)在蛋种鸡中的应用效果进行观察比较。试验组和对照组初免分别使用LDT3-A株传支冻干苗和Ma5+clone30二联冻干苗免疫,在初免后均按照鸡场原定的免疫程序实施其他传支活毒疫苗(如H120、H52)和灭活疫苗免疫,初免后2组所用疫苗完全一致。试验结果显示,LDT3-A株传支冻干苗在父母代蛋种鸡3日龄时1.2倍量滴鼻免疫,免疫后应激反应较小;2组在随后实施相同的其他传支活毒疫苗和灭活疫苗加强免疫的基础上,试验组鸡群得到了有效保护,而对照组鸡群发生了传染性支气管炎疫情。试验期内试验组鸡群总死亡率较对照组降低10.11%;151~210日龄段的平均产蛋率提高了7.0%,种蛋合格率、受精率、出雏率和健雏率分别提高3.0%、2.3%、0.7%和3.2%,料蛋比降低了0.1。研究结果为蛋种鸡场优化筛选鸡传染性支气管炎免疫用疫苗和免疫程序,以及提高其免疫预防效果提供了临床依据。
关键词： LDT3-A株 鸡传染性支气管炎 冻干苗 蛋种鸡 免疫效果
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PCR法检测活毒疫苗中禽白血病病毒污染
《中国兽医杂志 》 2014 北大核心
摘要：为调查活毒疫苗中禽白血病病毒(ALV)污染情况,随机抽取安徽省鸡群使用的国内外公司(国内7家、国外1家)活毒疫苗(5个品种),先针对ALV各亚群保守的pol基因设计一对引物进行PCR检测,进一步针对env基因设计2对特异性引物,进行ALV J亚型和A~E亚型PCR检测。pol基因结果为鸡传染性囊病病毒(IBDV)B87株国内7个公司为阳性,鸡痘(AP)、鸡传染性喉气管炎(ILT)某国外公司为阳性,鸡新城疫(ND)LaSota株国内某公司为阳性。env基因结果为IBDV-B87株(国内某公司)和AP为J亚型阳性,ILT、ND-LaSota株和IBDV-B87株(国内另6个公司)为A~E亚型阳性。本研究共检测疫苗120份,ALV检出率达28.57%。因此,使用PCR法可作为活毒疫苗中ALV污染检测的有效方法,同时可以进一步鉴定污染的ALV是J亚型或A~E亚型。
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安徽两个鸡场ALV-J分离株gp85基因的克隆及序列分析
《动物医学进展 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为研究J-亚群禽白血病病毒(ALV-J)在安徽省鸡群中的遗传变异趋势,对分离到的2株安徽省ALV-J毒株,克隆了其gp85基因序列,并与国内外分离毒株的相应基因序列进行了比较。结果显示,ALVJ gp85基因序列具有高度的易变性,可变氨基酸残基占全长序列的22.8%。其中高变区hr1和hr2具有较多的可变位点,而可变区vr2和vr3相对较为保守。二级结构预测显示ALV-J gp85蛋白含有大量的无规则卷曲结构,尤其是hr2区域。同源性分析表明,毒株AH1103和AH1104的gp85氨基酸序列同源性为95.8%;毒株AH1103与毒株BJ090201J,ev/J的gp85序列同源性最高,毒株AH1104的gp85序列则与国内毒株HuB09JY04的同源性最高。进化分析显示,毒株AH1103和AH1104均与国内毒株NX0101和SD07LK1及美国分离株4817的遗传距离较远。
关键词： J-亚群禽白血病病毒 gp85基因 序列分析
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活毒疫苗中禽白血病病毒污染的检测方法探讨
《安徽农业科学 》 2013 北大核心
摘要：[目的]探讨活毒疫苗中禽白血病病毒污染的检测方法。[方法]随机抽取安徽省鸡群使用的国内外活毒疫苗,使用对禽白血病病毒(ALV)群特异性p27抗原ELISA检测试剂盒进行检测,同时根据禽白血病病毒各亚群保守的pol基因设计引物,进行PCR检测。[结果]7个国内公司鸡传染性法氏囊B87株检测结果均为阳性,某国外公司鸡痘、鸡传染性喉气管炎检测结果呈阳性,某国内公司为阳性。鸡新城疫lasota株共检测疫苗35份,检出率达28.57%。ELISA检测结果与PCR结果相一致。[结论]使用p27抗原ELISA检测试剂盒和PCR法均可作为活毒疫苗中ALV污染检测的有效方法,说明活毒疫苗中ALV污染是ALV传播的重要因素。
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