文献类型： 中文期刊
作者： 沈学怀 1 ; 潘孝成 1 ; 巩雅静 2 ; 张丹俊 1 ; 赵瑞宏 1 ; 胡小苗 1 ; 戴银 1 ; 侯红艳 1 ; 周学利 1 ; 朱传民 1 ;
作者机构： 1.安徽省农业科学院畜牧兽医研究所
2.安徽农业大学动物科技学院
关键词： 猪流行性腹泻病毒;SYBR GreenⅠ;荧光定量RT-PCR
期刊名称： 养猪
ISSN： 1002-1957
年卷期： 2014 年 06 期
页码： 109-112
摘要： 根据Gen Bank登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)毒株(登录号KJ960180)的M基因保守序列,设计1对扩增片段大小为299 bp的特异性引物,经PCR扩增、克隆、测序鉴定后,提取质粒作为阳性标准品,建立了PEDV的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法。该方法在1.21×103~1.21×108拷贝/μL范围内呈现良好的线性,相关系数(R2)为0.999,扩增效率为99%,扩增产物的熔解曲线为单个特异峰,产物Tm值为85.5~86℃,最低检测限为1.21×101拷贝/μL。本研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、重复性好、成本低且操作简单,适用于PEDV的早期诊断、定量研究和流行病学监测。
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