科研产出
番鸭胚成纤维细胞的原代分离与培养研究
《动物医学进展 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为建立番鸭胚成纤维细胞(MDEF)的体外培养、传代和冻存技术,选用11胚龄番鸭胚,2.5g/L胰蛋白酶消化,原代MDEF于含100 mL/L血清的DMED培养液中培养;研究热、冷两种消化方法对MDEF消化密度及活率的影响,探讨不同血清浓度对MDEF生长、冻存活性的影响,以及离心对MDEF传代和复苏时细胞活率的影响。结果显示,胰酶消化法获得了MDEF,细胞贴壁紧密,生长良好;冷消化得到的原代MDEF密度和活率均高于热消化;血清浓度在20mL/L~100mL/L范围内,浓度越高MDEF生长速度越快;血清浓度显著影响MDEF复苏的活率;MDEF冻存液中DMSO∶血清∶培养液比例为1∶2∶7冻存效果良好;在MDEF传代和复苏过程中去除离心操作,不仅可简化操作,细胞活率也有一定提高。本研究建立了MDEF的原代分离和培养方法,为适用于番鸭相关研究的体外细胞培养体系奠定基础。
关键词： MDEF 消化方式 血清浓度 冻存 离心 细胞活率
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番鸭细小病毒VP3基因克隆和序列分析
《动物医学进展 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为研究番鸭细小病毒基因遗传变异特征,通过PCR技术获得了番鸭细小病毒结构蛋白基因VP3序列AH-MDPV-VP3,并将该序列与GenBank数据库中登录的9条番鸭、鹅和鸭细小病毒基因相应序列进行了比对分析。测序结果可见番鸭细小病毒VP3基因全长1 605bp,编码534个氨基酸。氨基酸序列同源性和进化分析表明AH-MDPV-VP3与国内两个番鸭细小病毒基因KC171936和KM093740同源性较高,分别为100%和98.3%,且三者之间亲缘关系较近,来源于共同祖先;而与鹅细小病毒,尤其与台湾分离的鸭细小病毒基因AY382891和AY382892同源性相对较低,分别为91.6%和90.8%,遗传距离也相对较远。同时可见番鸭、鹅和鸭细小病毒的VP3基因各自较为保守,仅有少数氨基酸发生变异。本研究初步获得番鸭细小病毒VP3基因分子特征,为下一步该基因在免疫诊断及免疫防治中的应用奠定了基础。
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抗番鸭细小病毒卵黄抗体的制备
《安徽农业科学 》 2015
摘要：[目的]有效预防和治疗番鸭细小病毒病。[方法]用番鸭细小病毒连续免疫产蛋母鸡3次,收集鸡蛋,并制备出高免卵黄抗体。通过琼脂扩散试验对制备的卵黄抗体进行效价测定,用雏番鸭进行中和与治疗试验。[结果]制备的卵黄抗体琼扩效价达到1∶32,能有效中和番鸭细小病毒对雏番鸭的致病性,对发病的雏番鸭有很好的治疗作用。[结论]该研究为番鸭细小病毒的预防和治疗提供了一种有效的生物制品。
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淮南麻黄鸡MHCⅠα链基因的克隆及序列分析
《动物医学进展 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：典型的主要组织相容性复合体(MHC)是抗原递呈的关键分子,具有重要的免疫功能,与多种疾病密切相关。为深入了解地方品种鸡MHCⅠ类α分子的特征,尤其是抗原结合区域的特点,通过RT-PCR技术获得了29个淮南麻黄鸡完整的α链基因,并进行了分析。结果显示,淮南麻黄鸡MHCⅠα分子高度多态,但主要集中在α1和α2区域,该区变异氨基酸位点共68个,其中高度变异22个。淮南麻黄鸡MHCⅠ分子α1和α2区域氨基酸序列同源性介于79.3%~99.5%之间,仅少部分序列完全一致。鸡氨基酸序列同源性与鸭较高,介于57.6%~64.1%之间;其次为人和鼠。进化分析显示,淮南麻黄鸡MHCⅠ分子α1和α2区域分属于两个类群,但未显示明显的品种差异。此外,鸡与鸭的亲缘关系较近,与其他物种则遗传距离较远。研究结果表明,淮南麻黄鸡MHC分子在进化过程中呈现高度的多态性,但受到病原体的选择压力,多态性主要位于抗原肽结合部分的α1和α2区域。
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鸡球虫的分离与感染试验
《安徽农业科学 》 2015
摘要：[目的]为探讨长期有效的鸡球虫病防控方法奠定基础。[方法]分离并培养鸡球虫卵囊,通过感染雏鸡试验研究其卵囊发育和感染的过程。[结果]分离到的球虫卵囊大多形态饱满,为宽椭圆形,少数为卵圆形,壁光滑,中间明显可见1个圆形核,原生质呈淡褐色,卵囊大小约为18.5~25.5μm×16.7~22.5μm。正常的孢子化卵囊多能见到分化明显的4个孢子,18 h可看到部分卵囊孢子化,36h孢子化达80%。接种后发病雏鸡的体重缓慢增加,血便明显,死亡率较高,同时解剖可见盲肠病变明显,肠壁增厚,严重者因充满大量血液而盲肠肿大。[结论]根据卵囊的形态、发病鸡的临床表现、卵囊寄生部位和盲肠病理变化等特征,初步判断分离的球虫主要为柔嫩艾美耳球虫。
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PCR法检测活毒疫苗中禽白血病病毒污染
《中国兽医杂志 》 2014 北大核心
摘要：为调查活毒疫苗中禽白血病病毒(ALV)污染情况,随机抽取安徽省鸡群使用的国内外公司(国内7家、国外1家)活毒疫苗(5个品种),先针对ALV各亚群保守的pol基因设计一对引物进行PCR检测,进一步针对env基因设计2对特异性引物,进行ALV J亚型和A~E亚型PCR检测。pol基因结果为鸡传染性囊病病毒(IBDV)B87株国内7个公司为阳性,鸡痘(AP)、鸡传染性喉气管炎(ILT)某国外公司为阳性,鸡新城疫(ND)LaSota株国内某公司为阳性。env基因结果为IBDV-B87株(国内某公司)和AP为J亚型阳性,ILT、ND-LaSota株和IBDV-B87株(国内另6个公司)为A~E亚型阳性。本研究共检测疫苗120份,ALV检出率达28.57%。因此,使用PCR法可作为活毒疫苗中ALV污染检测的有效方法,同时可以进一步鉴定污染的ALV是J亚型或A~E亚型。
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鸡传染性支气管炎LDT3-A株冻干苗对蛋种鸡的免疫效果观察
《中国畜牧兽医 》 2014 北大核心
摘要：本试验旨在对中国自主研发的LDT3-A株鸡传染性支气管炎冻干苗(简称LDT3-A株传支冻干苗)在蛋种鸡中的应用效果进行观察比较。试验组和对照组初免分别使用LDT3-A株传支冻干苗和Ma5+clone30二联冻干苗免疫,在初免后均按照鸡场原定的免疫程序实施其他传支活毒疫苗(如H120、H52)和灭活疫苗免疫,初免后2组所用疫苗完全一致。试验结果显示,LDT3-A株传支冻干苗在父母代蛋种鸡3日龄时1.2倍量滴鼻免疫,免疫后应激反应较小;2组在随后实施相同的其他传支活毒疫苗和灭活疫苗加强免疫的基础上,试验组鸡群得到了有效保护,而对照组鸡群发生了传染性支气管炎疫情。试验期内试验组鸡群总死亡率较对照组降低10.11%;151~210日龄段的平均产蛋率提高了7.0%,种蛋合格率、受精率、出雏率和健雏率分别提高3.0%、2.3%、0.7%和3.2%,料蛋比降低了0.1。研究结果为蛋种鸡场优化筛选鸡传染性支气管炎免疫用疫苗和免疫程序,以及提高其免疫预防效果提供了临床依据。
关键词： LDT3-A株 鸡传染性支气管炎 冻干苗 蛋种鸡 免疫效果
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不同部位接种禽流感油乳剂灭活疫苗对笼养蛋鸡血清抗体和生产性能的影响
《中国家禽 》 2014 北大核心
摘要：为了解不同部位接种禽流感油乳剂灭活疫苗对笼养蛋鸡血清抗体和生产性能的影响,比较了笼养蛋鸡颈部皮下、颈背部皮下、胸部肌肉和腿部肌肉接种疫苗后,免疫鸡群的应激反应、局部病变发生情况、30 d内的产蛋性能变化以及免疫20、50、80 d时的血清H5、H9AIV HI抗体效价。结果表明,不同部位接种疫苗均可显著提高血清抗体水平,并产生程度不等的应激反应和局部病变;其中以腿部肌肉接种产生的血清抗体水平较高且相对稳定,应激反应和对产蛋性能的影响相对较小,并具有操作方便和无需辅助保定等优点,是笼养蛋鸡较为理想的禽流感油乳剂灭活疫苗免疫接种方式。
关键词： 禽流感油乳剂灭活疫苗 免疫部位 生产性能 抗体水平
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鸡主要组织相容性复合体Ⅰβ微球蛋白(β2m)基因的克隆及序列分析
《中国畜牧兽医 》 2014 北大核心
摘要：为深入了解鸡主要组织相容性复合体Ⅰ(major histocompatibility complex classⅠ,MHCⅠ)β微球蛋白(β2m)分子的特征,研究β2m的免疫作用机理,试验通过RT-PCR技术获得了15条3个地方品种鸡完整的典型的MHCⅠβ2 m基因,将该序列与GenBank数据库中登录的鸭、人、鼠、鱼、猴、马和猪7个不同物种的MHCⅠβ2m分子序列进行了比对分析。结果显示,15条鸡β2m氨基酸序列同源性在98.0%~100%之间,大部分序列完全一致。鸡β2m氨基酸序列与鸭同源性最高,为60.6%;最低的则是来源于草鱼的β2m氨基酸序列,仅为33.3%。遗传进化分析进一步证实鸡与鸭的MHCⅠβ2m亲缘关系较近,与其他物种则遗传距离较远。此外,序列分析发现鸡β2 m基因高度保守,仅个别碱基发生突变。其成熟肽序列的第24和79位为半胱氨酸,在所比对的动物中均未发生突变;同时在成熟肽的第77~83位之间存在免疫球蛋白超基因家族的特征基序"YXCXVXH"。研究结果表明,鸡与其他物种的MHCⅠβ2m分子具有相同的免疫功能基本单位,同时又具备独特的结构特点。
关键词： 鸡主要组织相容性复合体 β微球蛋白基因 序列分析
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