鸡MHCⅠα和β2m链基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

戴银; 胡晓苗; 赵瑞宏; 侯宏艳; 沈学怀; 潘孝成; 周学利; 张丹俊; 《中国畜牧兽医 》 2016 北大核心

摘要：为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类(major histocompatibility complex,MHCⅠ)分子在免疫应答中的作用机制,试验经PCR克隆获得MHCⅠα和β_2m链基因,随后插入带有荧光标签蛋白的真核表达载体,成功构建了重组质粒pEGFP-MHCⅠα和pmCherry-MHCⅠβ_2m,并通过脂质体法转染293T真核表达细胞。荧光显微镜观察可见,MHCⅠα和β_2m分子主要分布于真核细胞的内膜系统,改变了与之融合的荧光蛋白在细胞内的定位。此外,Western blotting检测可见大小约68.3和41.3ku的目的蛋白反应带,表明重组质粒能够在293T细胞中顺利表达,且表达蛋白与鸡MHCⅠ类分子的相应抗体可发生特异性结合反应,具有良好的免疫学活性。

关键词： 鸡MHCⅠα基因 鸡MHCⅠβ2m链基因 真核表达载体 293T细胞

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储存环境对鸡蛋壳表面3种沙门氏菌存活与迁移的影响

沈学怀; 翟银建; 张丹俊; 潘孝成; 赵瑞宏; 戴银; 胡晓苗; 朱传民; 《中国畜牧兽医 》 2016 北大核心

摘要：为探明不同储存环境对蛋壳表面沙门氏菌存活和向蛋内迁移的影响,在鸡蛋壳表面人工接种肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌,试验环境设定温度4、25和37℃,环境相对湿度(RH)设定为50%和90%,在不同的储存环境下,各个时间点检测蛋壳表面沙门氏菌数量与蛋内容物中沙门氏菌污染情况。结果显示,4℃环境下可显著减少蛋壳表面3种沙门氏菌的数量;50%RH、25和37℃环境下蛋壳表面3种沙门氏菌的数量均逐渐下降;90%RH、25℃环境下蛋壳表面肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌在个别时间点出现数量反弹,其总体数量呈现下降趋势,37℃环境下鸡白痢沙门氏菌的数量快速下降,而肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌的数量先下降后上升,并保持在接种的数量级水平。鸡蛋内容物的检测结果显示,肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌在高温、高湿环境下更易被检出,而鸡白痢沙门氏菌始终未被检出。综上所述,低温、低湿可减少蛋壳表面沙门氏菌存活,并阻止其菌体向蛋内迁移,高温、高湿环境促进蛋壳表面沙门氏菌的增殖,增加了其向蛋内迁移的几率,不同血清型沙门氏菌在鸡蛋壳表面的存活和向蛋内迁移的侵袭力存在一定差异。

关键词： 鸡蛋 沙门氏菌 存活 迁移 鸡蛋内容物

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猪流行性腹泻病毒卵黄抗体的制备与应用

潘孝成; 赵瑞宏; 沈学怀; 张丹俊; 胡晓苗; 周学利; 戴银; 侯宏艳; 钱坤; 《养猪 》 2016

摘要：用猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)SD株免疫产蛋鸡,收集卵黄制备出特异性PEDV抗体。人工感染后治疗结果显示,一次抗体治疗组可减少死亡率50.0个百分点,两次抗体治疗组可减少死亡率83.3个百分点;3家自然发病猪场的临床应用表明,相较于对照组,抗体治疗组可减少仔猪死亡率分别为67.7个百分点、57.0个百分点和77.5个百分点。

关键词： 猪流行性腹泻病毒 卵黄抗体 制备 应用

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鸡MHCⅠ分子二聚体融合基因的构建及表达

戴银; 胡晓苗; 赵瑞宏; 侯宏艳; 沈学怀; 潘孝成; 周学利; 张丹俊; 《中国农学通报 》 2016 CSCD

摘要：为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(major histocompatibility complex,MHCⅠ)的作用机制,提高其抗原呈递的效率,获得生物活性较好的鸡MHCⅠ分子二聚体,采用4个不同长度的连接肽G_4S、(G_4S)_2、(G_4S)_3和(G_4S)_4,通过基因重组技术将MHCⅠα和β2m链基因共价连接,随后插入带有绿色荧光标签蛋白的真核表达载体,成功构建了4个重组质粒pEGFP-MHCⅠβ_2m-α。真核细胞表达后,荧光显微镜观察可见,各重组MHCⅠ二聚体分子均主要分布于真核细胞的内膜系统。此外,Western Blot检测均可见蛋白大小约80.0 k D左右的特异反应带,表达蛋白与鸡MHCⅠ类分子的相应抗体可发生特异性结合反应。研究结果表明各连接肽的重组质粒p EGFP-MHCⅠβ_2m-α均能够在真核细胞中顺利表达,且融合蛋白具有良好的免疫学活性。

关键词： 鸡MHCⅠ分子 二聚体 真核表达

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山羊的绵羊肺炎支原体的分离和鉴定

侯宏艳; 惠文巧; 张丹俊; 赵瑞宏; 戴银; 胡晓苗; 《安徽农业科学 》 2015

摘要：[目的]了解安徽省某山羊场肺炎症状的发生原因。[方法]从安徽省某山羊场采集病料样品,从山羊肺脏组织中分离致病菌并进行纯化,并通过形态学观察、生化试验、PCR对其进行鉴定。[结果]成功从患有肺炎的山羊肺脏组织中分离出致病菌,通过形态学观察、生化试验和PCR鉴定为绵羊肺炎支原体。[结论]该研究可为安徽省山羊支原体肺炎的防控及病原学研究提供科学依据。

关键词： 山羊 绵羊肺炎支原体 分离 鉴定

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鹅源鸭疫里默菌的分离鉴定与药敏试验

胡晓苗; 戴银; 沈学怀; 赵瑞宏; 侯宏艳; 潘孝成; 周学利; 张丹俊; 朱传明; 《中国兽医杂志 》 2015 北大核心

摘要：鹅传染性浆膜炎是由鸭疫里默菌(Riemerella anatipesifer,RA)引起鹅的以纤维蛋白渗出并在脏器表面沉积,胸、腹腔大量积液为特征的一种接触传染性疾病,其特征是纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、干酪型输卵管炎和脑膜炎。2~8周龄鹅多发,发病率90%,死亡率10%~40%,给养鹅业造成很大经济损失。国内有关鹅传染性浆膜炎研究比较少,胡清海"~([1])研究表明,2株鹅源RA分离株对

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鸡MHCⅠ类分子信号肽的预测及其序列特征

戴银; 王骏俊; 沈学怀; 胡晓苗; 赵瑞宏; 张丹俊; 《畜牧与饲料科学 》 2015

摘要：旨在进一步研究MHCⅠ类分子作用机制,分析MHCⅠ类分子α链和β2m链的信号肽序列特征。运用信号肽分析软件预测淮南麻黄鸡MHCⅠ类分子的α链和β2m链信号肽区域,通过序列比对,进一步分析鸡MHCⅠ类分子2条链的序列特征。信号肽分析软件预测结果表明,鸡MHCⅠ类分子的α链和β2m链均存在信号肽,且均由21个氨基酸残基组成。序列分析结果表明,鸡MHCⅠ类分子β2m链信号肽区域的氨基酸序列较为保守,但α链信号肽区域则呈现出一定的多态性,有23.8%的氨基酸残基发生突变。此外,将鸡MHCⅠ类分子信号肽序列与鸭、人和鼠的相应区域进行比对,表明鸡与鸭的α链和β2m链分子信号肽相似性均较高,分别为60%和65%,但与人和鼠的相似性均较低。

关键词： 鸡 MHCⅠ类分子 信号肽 序列特征

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抗番鸭细小病毒卵黄抗体的制备

赵瑞宏; 沈学怀; 戴银; 张丹俊; 胡晓苗; 侯宏艳; 潘孝成; 周学利; 《安徽农业科学 》 2015

摘要：[目的]有效预防和治疗番鸭细小病毒病。[方法]用番鸭细小病毒连续免疫产蛋母鸡3次,收集鸡蛋,并制备出高免卵黄抗体。通过琼脂扩散试验对制备的卵黄抗体进行效价测定,用雏番鸭进行中和与治疗试验。[结果]制备的卵黄抗体琼扩效价达到1∶32,能有效中和番鸭细小病毒对雏番鸭的致病性,对发病的雏番鸭有很好的治疗作用。[结论]该研究为番鸭细小病毒的预防和治疗提供了一种有效的生物制品。

关键词： 番鸭细小病毒 卵黄抗体 制备

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番鸭胚成纤维细胞的原代分离与培养研究

沈学怀; 张丹俊; 潘孝成; 戴银; 赵瑞宏; 胡晓苗; 侯红艳; 周学利; 朱传民; 《动物医学进展 》 2015 北大核心 CSCD

摘要：为建立番鸭胚成纤维细胞(MDEF)的体外培养、传代和冻存技术,选用11胚龄番鸭胚,2.5g/L胰蛋白酶消化,原代MDEF于含100 mL/L血清的DMED培养液中培养;研究热、冷两种消化方法对MDEF消化密度及活率的影响,探讨不同血清浓度对MDEF生长、冻存活性的影响,以及离心对MDEF传代和复苏时细胞活率的影响。结果显示,胰酶消化法获得了MDEF,细胞贴壁紧密,生长良好;冷消化得到的原代MDEF密度和活率均高于热消化;血清浓度在20mL/L~100mL/L范围内,浓度越高MDEF生长速度越快;血清浓度显著影响MDEF复苏的活率;MDEF冻存液中DMSO∶血清∶培养液比例为1∶2∶7冻存效果良好;在MDEF传代和复苏过程中去除离心操作,不仅可简化操作,细胞活率也有一定提高。本研究建立了MDEF的原代分离和培养方法,为适用于番鸭相关研究的体外细胞培养体系奠定基础。

关键词： MDEF 消化方式 血清浓度 冻存 离心 细胞活率

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鸭坦布苏病毒对产蛋鸡的致病性研究

张丹俊; 沈学怀; 赵瑞宏; 戴银; 胡晓苗; 潘孝成; 侯宏艳; 周学利; 朱传民; 《中国家禽 》 2015 北大核心

摘要：为探明鸭坦布苏病毒对产蛋鸡的致病性和不同感染途径对其产蛋性能的影响,分别选用罗曼蛋鸡、海兰蛋鸡和淮南麻黄鸡3个品种进行人工接种病毒试验。结果表明,3个品种产蛋鸡接种病毒后均出现产蛋下降,产蛋率最高下降80%以上,除产蛋和早期采食量下降及后期严重脱羽外,感染鸡无其他临床症状,产蛋恢复的速度和程度不同品种间存在一定差异,感染后无鸡只死亡;滴鼻组和同居组鸡群产蛋下降和恢复的程度低于肌肉注射组,重复感染组未发生明显产蛋下降;剖检病变可见一致的卵巢组织出血、变性、坏死和萎缩,其他器官无肉眼可见病变;从感染鸡卵巢组织中可检测到鸭坦布苏病毒核酸。综上所述,鸭坦布苏病毒对不同品种产蛋鸡均具有致病性,主要引发产蛋下降,病毒在鸡群中的传播可能不仅限于吸血昆虫,空气传播感染也是其重要的传播途径;感染康复鸡只对再次感染具有一定的抵抗力。研究结果为产蛋鸡不明原因产蛋下降提供了新的诊断方向,为坦布苏病毒病的有效防控发出了预警信号。

关键词： 鸭坦布苏病毒 产蛋鸡 致病性 临床症状 剖检病变

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