科研产出
鸡MHCⅠα和β2m的原核表达与多克隆抗体的制备
《动物医学进展 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为制备MHCⅠ基因工程疫苗的基础材料,构建了鸡MHCⅠ分子重组质粒并进行原核表达,进而制备鸡MHCⅠ分子的多克隆抗体。应用PCR方法,克隆鸡MHCⅠα和β2m基因,构建重组载体pETMHCⅠα和pET-MHCⅠβ2m,经PCR、双酶切和测序鉴定后,将重组质粒在大肠埃希菌Rosetta中进行诱导表达,融合蛋白纯化后,接种昆明小鼠制备多克隆抗体,血清稀释后用免疫印迹法(Western blot)分析。结果表明,鸡MHCⅠα和β2m基因在大肠埃希菌中成功表达,融合蛋白分子质量分别约为52.1ku和33.0ku;制备的鼠抗鸡MHCⅠα和β2m链多克隆抗体,经Western blot检测证实抗体特异性较强,可进一步用于鸡MHCⅠ分子的研究。
全文链接
请求原文
规模化羊场支原体性肺炎的防控
《畜牧与饲料科学 》 2016
摘要：羊支原体性肺炎是由多种支原体引起的一种急性或慢性高度接触性传染病,以高热、咳嗽、喘气、肺炎及消瘦为主要特征,羔羊发病率和死亡率都很高。对羊支原体性肺炎的病原、流行病学特征、诊断要点、综合防控措施等方面进行了综述,以期为规模化羊场有效防控该病提供参考。
全文链接
请求原文
散养鸡鼠伤寒沙门氏菌的分离·鉴定·耐药性研究
《安徽农业科学 》 2016
摘要：从疑似感染的成年散养鸡蛋壳和发病雏鸡的肝脏、脾脏中分离到2株细菌,通过培养特性、镜检结果、生化鉴定、血清学分型等,2株分离细菌均被鉴定为鼠伤寒沙门氏菌,分别命名为AH-DY01和AH-DY02。药物敏感性检测结果表明,AH-DY01对氟苯尼考、左氧氟沙星和环丙沙星敏感,对其他12种抗生素耐药;AH-DY02对阿米卡星、氟苯尼考、左氧氟沙星、复方新诺明、庆大霉素、链霉素、环丙沙星和大观霉素敏感,对其他7种药物耐药,2株沙门氏菌均表现多重耐药性。动物回归试验结果表明,2株鼠伤寒沙门氏菌均可致死雏鸡。对分离菌的16S r DNA进行测序与遗传进化分析,结果表明AH-DY01与标准菌株ATCC-1592和ATCC13311的同源性最高,而AH-DY02与日本分离株之间的亲缘关系最近。
全文链接
请求原文
鸡MHCⅠα和β2m链基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达
《中国畜牧兽医 》 2016 北大核心
摘要：为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类(major histocompatibility complex,MHCⅠ)分子在免疫应答中的作用机制,试验经PCR克隆获得MHCⅠα和β_2m链基因,随后插入带有荧光标签蛋白的真核表达载体,成功构建了重组质粒pEGFP-MHCⅠα和pmCherry-MHCⅠβ_2m,并通过脂质体法转染293T真核表达细胞。荧光显微镜观察可见,MHCⅠα和β_2m分子主要分布于真核细胞的内膜系统,改变了与之融合的荧光蛋白在细胞内的定位。此外,Western blotting检测可见大小约68.3和41.3ku的目的蛋白反应带,表明重组质粒能够在293T细胞中顺利表达,且表达蛋白与鸡MHCⅠ类分子的相应抗体可发生特异性结合反应,具有良好的免疫学活性。
关键词： 鸡MHCⅠα基因 鸡MHCⅠβ2m链基因 真核表达载体 293T细胞
全文链接
请求原文
储存环境对鸡蛋壳表面3种沙门氏菌存活与迁移的影响
《中国畜牧兽医 》 2016 北大核心
摘要：为探明不同储存环境对蛋壳表面沙门氏菌存活和向蛋内迁移的影响,在鸡蛋壳表面人工接种肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌,试验环境设定温度4、25和37℃,环境相对湿度(RH)设定为50%和90%,在不同的储存环境下,各个时间点检测蛋壳表面沙门氏菌数量与蛋内容物中沙门氏菌污染情况。结果显示,4℃环境下可显著减少蛋壳表面3种沙门氏菌的数量;50%RH、25和37℃环境下蛋壳表面3种沙门氏菌的数量均逐渐下降;90%RH、25℃环境下蛋壳表面肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌在个别时间点出现数量反弹,其总体数量呈现下降趋势,37℃环境下鸡白痢沙门氏菌的数量快速下降,而肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌的数量先下降后上升,并保持在接种的数量级水平。鸡蛋内容物的检测结果显示,肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌在高温、高湿环境下更易被检出,而鸡白痢沙门氏菌始终未被检出。综上所述,低温、低湿可减少蛋壳表面沙门氏菌存活,并阻止其菌体向蛋内迁移,高温、高湿环境促进蛋壳表面沙门氏菌的增殖,增加了其向蛋内迁移的几率,不同血清型沙门氏菌在鸡蛋壳表面的存活和向蛋内迁移的侵袭力存在一定差异。
全文链接
请求原文
鸡MHCⅠ分子二聚体融合基因的构建及表达
《中国农学通报 》 2016 CSCD
摘要：为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(major histocompatibility complex,MHCⅠ)的作用机制,提高其抗原呈递的效率,获得生物活性较好的鸡MHCⅠ分子二聚体,采用4个不同长度的连接肽G_4S、(G_4S)_2、(G_4S)_3和(G_4S)_4,通过基因重组技术将MHCⅠα和β2m链基因共价连接,随后插入带有绿色荧光标签蛋白的真核表达载体,成功构建了4个重组质粒pEGFP-MHCⅠβ_2m-α。真核细胞表达后,荧光显微镜观察可见,各重组MHCⅠ二聚体分子均主要分布于真核细胞的内膜系统。此外,Western Blot检测均可见蛋白大小约80.0 k D左右的特异反应带,表达蛋白与鸡MHCⅠ类分子的相应抗体可发生特异性结合反应。研究结果表明各连接肽的重组质粒p EGFP-MHCⅠβ_2m-α均能够在真核细胞中顺利表达,且融合蛋白具有良好的免疫学活性。
全文链接
请求原文
基于MHC分子的新型DNA疫苗研究进展
《畜牧与饲料科学 》 2015
摘要：DNA疫苗相对于传统疫苗,具有安全、方便、成本低等优点,但大多数MHC分子介导的DNA疫苗免疫途径不能够产生有效的免疫应答,是影响DNA疫苗免疫效果的主要因素之一。利用MHC分子特殊的免疫学功能,将其与抗原表位偶联,形成稳定抗原肽-MHC分子复合体,使"裸DNA"成为专业的抗原呈递分子的目标,并直接呈递给T细胞,能更有效地诱导机体免疫应答,无疑将成为改善DNA疫苗效率的有效途径。介绍了基于MHC分子开发新型DNA疫苗的研究进展,以期为新型核酸疫苗的设计与开发提供新思路。
关键词： DNA疫苗 MHC分子 抗原肽-MHC分子复合体
全文链接
请求原文
