科研产出
禽腺病毒AH株的分离与鉴定
《中国兽医杂志 》 2017 北大核心
摘要：为获得禽腺病毒毒株,将临床疑似Ⅰ群禽腺病毒感染病例的肝组织,通过接种SPF鸡胚进行病毒分离,用PCR方法对分离产物进行扩增,将PCR产物进行序列测定,对测定的序列在NCBI网上进行分析,结果显示,从病料可分离出病毒,用PCR方法特异性地扩增出了与设计片段大小相一致的片段,序列分析表明,分离株序列与禽腺病毒SD1-15分离株序列同源性99%,说明分离株为Ⅰ群禽腺病毒血清4型。
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鸡MHC Ⅰ分子单链三聚体真核表达载体的构建和表达
《安徽农业科学 》 2017
摘要：[目的]探索主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(Major Histocompatibility Complex,MHC Ⅰ)提高抗原呈递效率的方法,获得具有免疫学活性的抗原肽-MHC Ⅰ分子单链三聚体.[方法]采用基因重组技术,通过连接肽(G4S)3将鸡新城疫病毒抗原表位短肽HN(aa346-353)与鸡MHC Ⅰ(B-F)分子二聚体的编码基因共价串联,构建带有绿色荧光标签蛋白的真核表达载体pEGFP-HN346-353-B-Fβ2m-α.[结果]转染真核细胞293T后,荧光显微镜观察可见,重组融合蛋白HN346-353-B-Fβ2m-α分子三聚体主要表达定位于真核细胞的内膜系统.Western Blot结果表明,在预期蛋白分子量大小位置有明显的特异反应带,重组蛋白与其相应抗体可发生特异性结合反应.[结论]重组质粒能够在真核细胞中表达,且融合蛋白具有良好的生物学活性.
关键词： 鸡MHC B-F分子 单链三聚体 真核表达
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番鸭细小病毒安徽分离株结构蛋白基因的克隆及序列分析
《动物医学进展 》 2017 北大核心
摘要：为研究番鸭细小病毒(MDPV)安徽分离株的遗传变异特征,通过PCR扩增获得了MDPV结构蛋白(VP)基因全长序列AH-MDPV-VP,并将该序列与GenBank中登录的12条MDPV和鹅细小病毒(GPV)VP基因序列进行比对。结果显示,AH-MDPV-VP基因全长2 199bp,包括完整的VP1、VP2和VP3蛋白编码区。MDPV与GPV的VP基因部分序列一致,但具有明显的差异。进化分析显示,MDPV安徽分离株与基因重组型MDPV上海分离株SAAS-SHNH为同一分支,亲缘关系较近。同源性分析显示二者核苷酸序列同源性最高,为99.9%,且AH-MDPV-VP与GPV毒株SHFX1201的序列同源性也有89.5%。此外安徽分离株与其他MDPV的VP1、VP2和VP3基因同源性有逐步下降的趋势,而与GPV则相反呈上升趋势。进一步显示MDPV安徽分离株与基因重组型MDPV上海分离株SAAS-SHNH相似,可能为MDPV和GPV基因重组型水禽细小病毒。
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番鸭细小病毒病和鹅细小病毒病的特征和防控
《畜牧与饲料科学 》 2017
摘要：番鸭细小病毒病和鹅细小病毒病已成为水禽养殖中危害比较严重的传染病,其病原分别是番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV),二者临床上常在同一地区流行,有时还会发生混合感染。鹅细小病毒病和番鸭细小病毒病临床症状类似,均表现废食和下痢等消化道症状以及呼吸困难症状,鉴别诊断有一定的难度。虽然MDPV和GPV生物学特性相似,但二者致病力却有显著差异,MDPV只感染番鸭,GPV则既可感染鹅,又可感染番鸭,采用雏禽攻毒试验,可初步区分2种病毒。2种疫病均重在预防,除了加强饲养管理外,在该病流行地区,对雏禽免疫,或者在种禽产蛋前免疫,使禽苗获得被动免疫,均可达到较好的预防效果。
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安徽番鸭细小病毒的分离和PCR检测
《中国兽医杂志 》 2016 北大核心
摘要：为研究安徽省番鸭细小病毒遗传变异状况,通过番鸭胚接种分离了安徽流行株,并进行PCR检测。将扩增基因序列AH-MDPV-1和AH-MDPV-2在NCBI数据库中进行相似性搜索比对,结果显示,两者与番鸭细小病毒基因同源性均大于99%;与鹅细小病毒基因同源性分别介于79%~90%和78%~81%之间。进一步将AH-MDPV-1与7条参比的细小病毒基因序列进行比对,可见番鸭细小病毒的该部分基因相对较为保守,而与鹅细小病毒基因相应区域具有明显差异,表明该基因特异性较强,可以作为番鸭细小病毒的鉴定依据。同时可判定该病毒分离株为番鸭细小病毒。
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鸡MHCⅠα和β2m链基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达
《中国畜牧兽医 》 2016 北大核心
摘要：为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类(major histocompatibility complex,MHCⅠ)分子在免疫应答中的作用机制,试验经PCR克隆获得MHCⅠα和β_2m链基因,随后插入带有荧光标签蛋白的真核表达载体,成功构建了重组质粒pEGFP-MHCⅠα和pmCherry-MHCⅠβ_2m,并通过脂质体法转染293T真核表达细胞。荧光显微镜观察可见,MHCⅠα和β_2m分子主要分布于真核细胞的内膜系统,改变了与之融合的荧光蛋白在细胞内的定位。此外,Western blotting检测可见大小约68.3和41.3ku的目的蛋白反应带,表明重组质粒能够在293T细胞中顺利表达,且表达蛋白与鸡MHCⅠ类分子的相应抗体可发生特异性结合反应,具有良好的免疫学活性。
关键词： 鸡MHCⅠα基因 鸡MHCⅠβ2m链基因 真核表达载体 293T细胞
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鸡MHCⅠ分子二聚体融合基因的构建及表达
《中国农学通报 》 2016 CSCD
摘要：为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(major histocompatibility complex,MHCⅠ)的作用机制,提高其抗原呈递的效率,获得生物活性较好的鸡MHCⅠ分子二聚体,采用4个不同长度的连接肽G_4S、(G_4S)_2、(G_4S)_3和(G_4S)_4,通过基因重组技术将MHCⅠα和β2m链基因共价连接,随后插入带有绿色荧光标签蛋白的真核表达载体,成功构建了4个重组质粒pEGFP-MHCⅠβ_2m-α。真核细胞表达后,荧光显微镜观察可见,各重组MHCⅠ二聚体分子均主要分布于真核细胞的内膜系统。此外,Western Blot检测均可见蛋白大小约80.0 k D左右的特异反应带,表达蛋白与鸡MHCⅠ类分子的相应抗体可发生特异性结合反应。研究结果表明各连接肽的重组质粒p EGFP-MHCⅠβ_2m-α均能够在真核细胞中顺利表达,且融合蛋白具有良好的免疫学活性。
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基于MHC分子的新型DNA疫苗研究进展
《畜牧与饲料科学 》 2015
摘要：DNA疫苗相对于传统疫苗,具有安全、方便、成本低等优点,但大多数MHC分子介导的DNA疫苗免疫途径不能够产生有效的免疫应答,是影响DNA疫苗免疫效果的主要因素之一。利用MHC分子特殊的免疫学功能,将其与抗原表位偶联,形成稳定抗原肽-MHC分子复合体,使"裸DNA"成为专业的抗原呈递分子的目标,并直接呈递给T细胞,能更有效地诱导机体免疫应答,无疑将成为改善DNA疫苗效率的有效途径。介绍了基于MHC分子开发新型DNA疫苗的研究进展,以期为新型核酸疫苗的设计与开发提供新思路。
关键词： DNA疫苗 MHC分子 抗原肽-MHC分子复合体
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