科研产出
鸡MHC Ⅰ分子单链三聚体真核表达载体的构建和表达
《安徽农业科学 》 2017
摘要：[目的]探索主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(Major Histocompatibility Complex,MHC Ⅰ)提高抗原呈递效率的方法,获得具有免疫学活性的抗原肽-MHC Ⅰ分子单链三聚体.[方法]采用基因重组技术,通过连接肽(G4S)3将鸡新城疫病毒抗原表位短肽HN(aa346-353)与鸡MHC Ⅰ(B-F)分子二聚体的编码基因共价串联,构建带有绿色荧光标签蛋白的真核表达载体pEGFP-HN346-353-B-Fβ2m-α.[结果]转染真核细胞293T后,荧光显微镜观察可见,重组融合蛋白HN346-353-B-Fβ2m-α分子三聚体主要表达定位于真核细胞的内膜系统.Western Blot结果表明,在预期蛋白分子量大小位置有明显的特异反应带,重组蛋白与其相应抗体可发生特异性结合反应.[结论]重组质粒能够在真核细胞中表达,且融合蛋白具有良好的生物学活性.
关键词： 鸡MHC B-F分子 单链三聚体 真核表达
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番鸭细小病毒安徽分离株结构蛋白基因的克隆及序列分析
《动物医学进展 》 2017 北大核心
摘要：为研究番鸭细小病毒(MDPV)安徽分离株的遗传变异特征,通过PCR扩增获得了MDPV结构蛋白(VP)基因全长序列AH-MDPV-VP,并将该序列与GenBank中登录的12条MDPV和鹅细小病毒(GPV)VP基因序列进行比对。结果显示,AH-MDPV-VP基因全长2 199bp,包括完整的VP1、VP2和VP3蛋白编码区。MDPV与GPV的VP基因部分序列一致,但具有明显的差异。进化分析显示,MDPV安徽分离株与基因重组型MDPV上海分离株SAAS-SHNH为同一分支,亲缘关系较近。同源性分析显示二者核苷酸序列同源性最高,为99.9%,且AH-MDPV-VP与GPV毒株SHFX1201的序列同源性也有89.5%。此外安徽分离株与其他MDPV的VP1、VP2和VP3基因同源性有逐步下降的趋势,而与GPV则相反呈上升趋势。进一步显示MDPV安徽分离株与基因重组型MDPV上海分离株SAAS-SHNH相似,可能为MDPV和GPV基因重组型水禽细小病毒。
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安徽地区羊口疮病毒VIR基因PCR检测及遗传进化分析
《中国草食动物科学 》 2017
摘要：采集安徽某地区两个山羊场中疑似感染ORFV的羔羊唇部结痂病料,采用PCR方法对毒力基因VIR进行了扩增,并获得了目的片段VIR-1和VIR-2。同时将PCR产物克隆至p MD18-T载体,鉴定后测序。序列分析结果表明,两个羊场的毒力基因VIR-1和VIR-2基因片段与参考毒株的相关基因核苷酸同源性分别为95.8%~100%和95.4%~99.6%。基因进化树比较显示,两分离株分别与美国AY424975.1株和甘肃KF916586.1株的亲缘关系最近。
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H9N2亚型禽流感疫苗株的筛选
《中国兽医杂志 》 2017 北大核心
摘要：为了筛选免疫原性更好的H9N2亚型禽流感病毒疫苗株。本研究在分析H9N2病毒HA基因遗传进化规律基础上,对预选的毒株进行血凝效价(HA)、鸡胚半数感染量(EID50)测定及交叉血凝抑制试验,筛选出疫苗用毒株进行免疫攻毒保护试验。结果显示,CK/AH/AJ3/15株HA效价达11 log2、EID50值为9.17 log10/0.1 mL,有很好的繁殖能力;对当前流行株的HI反应效价比疫苗株F/98高2-3个滴度;以CK/AH/AJ3/15株制作灭活疫苗,整体保护率达到97.5%,比F/98疫苗株的85%明显提高。表明CK/AH/AJ3/15株可以作为H9N2亚型禽流感新型疫苗株的候选株。
关键词： H9N2亚型禽流感病毒 疫苗 筛选
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一株鸭源枯草芽胞杆菌的分离鉴定及药敏试验
《畜牧与饲料科学 》 2017
摘要：为了鉴定从患鸭疫里默氏杆菌病鸭脑组织中分离到的混合感染细菌,采用常规方法观察分离菌株的菌落形态、革兰染色特征、生化反应特点,采用细菌16S rDNA PCR及序列分析方法对分离菌株进行分子生物学鉴定。结果表明,分离菌株在胰蛋白大豆肉汤培养基上形成边缘不规则,凸起,表面灰白色,粗糙的大菌落;镜检呈革兰阳性杆菌,能够产生芽胞;在兔血平板上生长时出现明显的β溶血环;生化反应特点与枯草芽胞杆菌模式株基本相符,但略有不同;其16S rDNA序列与GenBank中已经报道的枯草芽胞杆菌16S rDNA序列的相似性达到99%,最终确定分离菌株为枯草芽胞杆菌;分离菌株对红霉素、万古霉素、阿莫西林等抗菌药物敏感,对克林霉素和多西环素中等敏感,仅对头孢噻肟耐药。研究结果为临床治疗由鸭疫里默氏杆菌和枯草芽胞杆菌引起的混合感染提供了科学用药方案。
关键词： 枯草芽胞杆菌 混合感染 表型鉴定 分子生物学鉴定 药敏试验
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鸡疑似克雷伯氏杆菌病的诊断与药敏试验
《安徽农业科学 》 2017
摘要：[目的]诊断疑似患有克雷伯氏杆菌病的发病鸡群。[方法]通过采取病鸡肝脏和脑组织,接种于胰蛋白胨琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、SS琼脂培养基、兔血琼脂培养基,培养出疑似克雷伯氏杆菌菌落,革兰氏染色发现该菌属于革兰氏阴性菌,将菌落进行溶血试验和生化试验。[结果]初步判断该菌为克雷伯氏杆菌。药敏试验中发现该菌对庆大霉素、妥布霉素、恩诺沙星、阿米卡星表现较敏感;对阿莫西林、卡那霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢曲松、多黏菌素、四环素有极强的耐药性;对于红霉素、新霉素的敏感性介于两者之间。[结论]药敏试验为治疗该菌提供了大致方向,同时提醒抗生素类药物切不可滥用,以免产生耐药性。
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鸡MHCⅠ分子二聚体融合基因的构建及表达
《中国农学通报 》 2016 CSCD
摘要：为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(major histocompatibility complex,MHCⅠ)的作用机制,提高其抗原呈递的效率,获得生物活性较好的鸡MHCⅠ分子二聚体,采用4个不同长度的连接肽G_4S、(G_4S)_2、(G_4S)_3和(G_4S)_4,通过基因重组技术将MHCⅠα和β2m链基因共价连接,随后插入带有绿色荧光标签蛋白的真核表达载体,成功构建了4个重组质粒pEGFP-MHCⅠβ_2m-α。真核细胞表达后,荧光显微镜观察可见,各重组MHCⅠ二聚体分子均主要分布于真核细胞的内膜系统。此外,Western Blot检测均可见蛋白大小约80.0 k D左右的特异反应带,表达蛋白与鸡MHCⅠ类分子的相应抗体可发生特异性结合反应。研究结果表明各连接肽的重组质粒p EGFP-MHCⅠβ_2m-α均能够在真核细胞中顺利表达,且融合蛋白具有良好的免疫学活性。
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规模化羊场支原体性肺炎的防控
《畜牧与饲料科学 》 2016
摘要：羊支原体性肺炎是由多种支原体引起的一种急性或慢性高度接触性传染病,以高热、咳嗽、喘气、肺炎及消瘦为主要特征,羔羊发病率和死亡率都很高。对羊支原体性肺炎的病原、流行病学特征、诊断要点、综合防控措施等方面进行了综述,以期为规模化羊场有效防控该病提供参考。
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安徽番鸭细小病毒的分离和PCR检测
《中国兽医杂志 》 2016 北大核心
摘要：为研究安徽省番鸭细小病毒遗传变异状况,通过番鸭胚接种分离了安徽流行株,并进行PCR检测。将扩增基因序列AH-MDPV-1和AH-MDPV-2在NCBI数据库中进行相似性搜索比对,结果显示,两者与番鸭细小病毒基因同源性均大于99%;与鹅细小病毒基因同源性分别介于79%~90%和78%~81%之间。进一步将AH-MDPV-1与7条参比的细小病毒基因序列进行比对,可见番鸭细小病毒的该部分基因相对较为保守,而与鹅细小病毒基因相应区域具有明显差异,表明该基因特异性较强,可以作为番鸭细小病毒的鉴定依据。同时可判定该病毒分离株为番鸭细小病毒。
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