科研产出
仔猪小肠上皮细胞的体外培养及猪流行性腹泻病毒对其感染性研究
《中国畜牧兽医 》 2020 北大核心
摘要：本研究旨在建立一种操作简单的仔猪小肠上皮细胞体外培养体系,为猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的相关研究提供材料.研究以未吃初乳的新生仔猪作为肠道供体,采用肠腔面刮取肠黏膜和机械分离分散的方式进行原代细胞的体外分离.采用0.1%胰蛋白酶差速消化法进行仔猪小肠上皮细胞的纯化;比较新生弱仔猪和正常仔猪作为供体对原代小肠上皮细胞活性的影响;MTT法比较不同代次原代细胞的增殖活性;免疫荧光和实时荧光定量RT-PCR方法检测PEDV毒株CV777在原代小肠上皮细胞感染和增殖情况.结果显示,本研究建立的体外分离培养方法能获得增殖活性良好的原代小肠上皮细胞,具有明显的"S"型细胞增殖曲线.通过胰酶差速消化可得到纯度高、形态单一的小肠上皮细胞,同时细胞连续传代5次仍保持良好的增殖活性.弱仔猪和正常仔猪分离培养的小肠上皮细胞的增殖活性比较显示,两者并没有明显区别,这为降低原代细胞培养的成本提供新的思路.免疫荧光和实时荧光定量RT-PCR结果显示,PEDV可感染本方法分离培养的仔猪原代小肠上皮细胞,并在其中进行复制增殖.本研究建立了一种操作简单、实用性强、成本较低的仔猪原代小肠上皮细胞体外培养方法,该方法培养的原代细胞可作为PEDV分离培养和相关研究的基础材料.
关键词： 仔猪小肠上皮细胞 体外培养 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 增殖活性 细胞传代
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3种中药制剂对肠炎沙门菌的体外抗菌和雏鸡感染试验
《中国兽医杂志 》 2020 北大核心
摘要：为评价香莲溶液、连蒲双清颗粒和高山大巴对沙门菌的体外抗菌以及对雏鸡感染沙门菌的保护性作用,测定3种药物的体外最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）及雏鸡接种肠炎沙门菌后的组织病变、体重、血清应激和抗氧化指标。结果显示,在试验范围内香连溶液的MIC和MBC分别为1∶300和1∶100;连蒲双清颗粒无体外抑菌和杀菌效果;高山大巴的MIC为24 g/L,试验浓度内未表现出杀菌效果;香连溶液和高山大巴的抗菌效果不受菌株耐药性的影响。3种中药可不同程度地减少沙门菌感染造成的组织病变和感染后期组织中沙门菌分离率,提高感染雏鸡的体重,降低血清中乳酸脱氢酶（LDH）、谷丙转氨酶（ALT/GPT）和丙二醛（MDA）水平,提高感染早期超氧化物歧化酶（T-SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的含量。本试验为市售中药防控沙门菌感染提供试验依据。
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猪流行性腹泻病毒IgG抗体间接ELISA检测方法的建立
《安徽农业科学 》 2020
摘要：为建立检测猪血清中猪流行性腹泻病毒(PEDV)IgG抗体的间接ELISA方法,以PEDV重组N蛋白和纯化全病毒为包被抗原,采用方阵滴定法优化反应条件,建立了2种检测猪血清中PEDV IgG抗体的间接ELISA方法.结果显示,纯化全病毒和重组N蛋白抗原的最佳包被浓度分别为1.00和4.92μg/mL,检测样品最佳稀释度分别为1∶100和1∶50,重复性试验的变异系数均小于10%,PEDV阳性血清的最低检测稀释倍数分别为1∶1 600和1∶800,对猪传染性胃肠炎病毒、猪伪狂犬病毒等阳性血清均无交叉反应性,2种方法对临床样品检测符合率为95.92%.这表明2种方法均具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于检测和评价血清中特异性PEDV IgG抗体.
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猪流行性腹泻病毒5株安徽流行株M基因的克隆与序列分析
《安徽农业科学 》 2019
摘要：为了解安徽省猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的遗传变异,对5株PEDV安徽流行株M基因进行RT-PCR扩增、序列测定和分析.结果表明,5株PEDV安徽流行毒株M基因的全长均为681 bp,编码226个氨基酸,核苷酸同源性为99.1%~99.9%,其与国内外PEDV参考毒株核苷酸同源性为96.9%~100%.进化树分析显示,5株流行毒株与CV777、attenuated DR13、LZC和CHS亲缘关系较远,与2011年后国内外PEDV分离株的亲缘关系较近.
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猪流行性腹泻病毒安徽分离株N基因的克隆与表达
《安徽农业科学 》 2019
摘要：[目的]克隆和表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的N基因.[方法]采用RT-PCR方法对PEDV FD株的N基因进行扩增,将扩增产物连接pET-28B载体,阳性质粒转入大肠杆菌BL21感受态细胞,诱导表达目的蛋白.[结果]PEDV FD株N基因序列全长为1326个核苷酸,编码441个氨基酸;重组N蛋白为可溶性表达,大小约58 ku;Western blot检测结果表明,重组N蛋白与PEDV抗体阳性血清发生特异性反应.[结论]该试验制备的PEDV重组N蛋白具有较好的免疫原性,可用于PEDV诊断方法的开发及相关研究.
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安徽地区禽源临床样品药敏试验结果分析
《中国兽医杂志 》 2019 北大核心
摘要：对2015-2017年安徽地区送检至安徽省兽医临床诊断中心的365份禽源临床样品的药敏试验结果进行分析,结果显示,10种常用抗生素检测中以2、3种可推荐的抗生素为主,在可推荐抗生素中头孢噻肟比例最高,达到70.14%,其次是阿米卡星和多西环素,分别为60.27%和49.04%,而阿莫西林、氟苯尼考和庆大霉素的比例均低于5%;在首选抗生素中头孢噻肟、阿米卡星和多西环素的比例分别为38.36%、30.96%和16.36%。氟苯尼考、庆大霉素、左氧氟沙星和头孢噻肟作为可推荐药物的比例逐年升高,阿莫西林、阿米卡星的比例则逐年降低,表现出一定的规律性。本分析结果对指导安徽地区禽病临床治疗用药具有重要的参考意义。
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4株禽腺病毒的鉴定和分析
《农业灾害研究 》 2019
摘要：[目的]对六安、郭河、宣城、肥西某养殖户送检的疑似腺病毒的病料进行分离鉴定,为进一步鉴别、预防和控制疾病提供科学的理论依据。[方法]首先采集病例中鸡的肝脏,提取病毒DNA,根据Genbank已登录腺病毒的hexon基因设计引物,通过PCR检测病料中腺病毒,对扩增的序列进行连接转化和阳性克隆子筛选,并对扩增到的序列进行测序鉴定,最后将获得的基因序列构建进化树分析确定安徽省部分地区禽腺病毒血清型。[结果]临床中疑似腺病毒感染的主要症状为心包积液和肝脏肿大,用设计的引物均检测出大小为599 bp的目的基因条带,序列比对结果发现,此次检测的腺病毒均为4型腺病毒。[结论]试验建立了快速检测禽腺病毒的方法,为安徽省地区禽腺病毒防控提供了理论依据。
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流行性腹泻病毒5株猪安徽流行株S基因的克隆与序列分析
《养猪 》 2019
摘要：为了解安徽省猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的遗传变异,试验对5株PEDV安徽流行毒株S基因进行RT-PCR扩增、序列测定和分析。结果显示,5株PEDV安徽流行毒株S基因的全长均为4 161 bp,编码1 386个氨基酸,核苷酸同源性为98.7%～99.8%,它们与国内外PEDV参考毒株核苷酸同源性在93.6%～99.8%之间;进化树分析显示,5株流行毒株与CV777、attenuated DR13、LZC和CHS亲缘关系较远,与2011年后国内外PEDV分离株亲缘关系较近。研究结果可为PEDV的防控和疫苗研制提供参考和依据。
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6株猪流行性腹泻病毒N基因的克隆与分析
《畜牧与饲料科学 》 2019
摘要：为了解安徽省猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异情况,采用胶体金试纸条检测安徽省境内发生疑似猪流行性腹泻病的病猪粪便(2013—2017年);对PEDV抗原阳性猪样品,利用RT-PCR方法扩增其PEDV N基因,并进行测序和序列分析.结果发现,经胶体金试纸条检测确认了6个猪流行性腹泻发病猪场;对来自该6个猪场的病料样品或病毒传代培养物进行RT-PCR扩增和测序,共获得6株PEDV流行毒株的N基因序列,其序列全长均为1326 bp,将其分别命名为N12、N22、N32、N42、N52和N62.核苷酸同源性分析显示,6株PEDV分离株N基因之间序列同源性为94.8%~99.8%.其中,5株PEDV分离株(N12、N22、N32、N52和N62)与PEDV疫苗株、经典毒株、2011年之前的我国分离株(LZC、CHS)的同源性较低(94.1%~96.3%),亲缘关系较远;与2011年后国内外PEDV分离株存在较高同源性(96.9%~99.2%),亲缘关系较近;而N42正好相反.该研究表明,近年来安徽各地猪场以PEDV新变异毒株的流行为主.
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