鸡MHCⅠ分子二聚体融合基因的构建及表达

戴银; 胡晓苗; 赵瑞宏; 侯宏艳; 沈学怀; 潘孝成; 周学利; 张丹俊; 《中国农学通报 》 2016 CSCD

摘要：为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(major histocompatibility complex,MHCⅠ)的作用机制,提高其抗原呈递的效率,获得生物活性较好的鸡MHCⅠ分子二聚体,采用4个不同长度的连接肽G_4S、(G_4S)_2、(G_4S)_3和(G_4S)_4,通过基因重组技术将MHCⅠα和β2m链基因共价连接,随后插入带有绿色荧光标签蛋白的真核表达载体,成功构建了4个重组质粒pEGFP-MHCⅠβ_2m-α。真核细胞表达后,荧光显微镜观察可见,各重组MHCⅠ二聚体分子均主要分布于真核细胞的内膜系统。此外,Western Blot检测均可见蛋白大小约80.0 k D左右的特异反应带,表达蛋白与鸡MHCⅠ类分子的相应抗体可发生特异性结合反应。研究结果表明各连接肽的重组质粒p EGFP-MHCⅠβ_2m-α均能够在真核细胞中顺利表达,且融合蛋白具有良好的免疫学活性。

关键词： 鸡MHCⅠ分子 二聚体 真核表达

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猪传染性胸膜肺炎在保育猪中的流行病学调查

谢艳霞; 周学利; 沈学怀; 赵瑞宏; 胡晓苗; 侯宏艳; 戴银; 潘孝成; 张丹俊; 王重龙; 吴东; 《农业灾害研究 》 2016

摘要：[目的]调查大、中型规模种猪场保育猪胸膜肺炎放射杆菌(APP)感染情况。[方法]用Apx IV-ELISA试剂盒检测272份保育猪血清。[结果 ]有88份猪血清样品检测到APP感染抗体阳性,阳性率为32.4%。[结论]APP普遍存在于各猪场,大、中型种猪场保育猪APP感染抗体阳性率偏高且无明显规律,保育猪APP的感染率与猪只是否发病无关,场外猪群的流动性对大型猪场内APP的感染率影响不大。

关键词： 胸膜肺炎放线杆菌 猪传染性胸膜肺炎 保育猪 感染率 流行病学

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安徽番鸭细小病毒的分离和PCR检测

戴银; 张丹俊; 沈学怀; 赵瑞宏; 胡晓苗; 侯宏艳; 潘孝成; 周学利; 《中国兽医杂志 》 2016 北大核心

摘要：为研究安徽省番鸭细小病毒遗传变异状况,通过番鸭胚接种分离了安徽流行株,并进行PCR检测。将扩增基因序列AH-MDPV-1和AH-MDPV-2在NCBI数据库中进行相似性搜索比对,结果显示,两者与番鸭细小病毒基因同源性均大于99%;与鹅细小病毒基因同源性分别介于79%~90%和78%~81%之间。进一步将AH-MDPV-1与7条参比的细小病毒基因序列进行比对,可见番鸭细小病毒的该部分基因相对较为保守,而与鹅细小病毒基因相应区域具有明显差异,表明该基因特异性较强,可以作为番鸭细小病毒的鉴定依据。同时可判定该病毒分离株为番鸭细小病毒。

关键词： 番鸭细小病毒 病毒分离 PCR检测

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猪流行性腹泻病毒卵黄抗体的制备与应用

潘孝成; 赵瑞宏; 沈学怀; 张丹俊; 胡晓苗; 周学利; 戴银; 侯宏艳; 钱坤; 《养猪 》 2016

摘要：用猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)SD株免疫产蛋鸡,收集卵黄制备出特异性PEDV抗体。人工感染后治疗结果显示,一次抗体治疗组可减少死亡率50.0个百分点,两次抗体治疗组可减少死亡率83.3个百分点;3家自然发病猪场的临床应用表明,相较于对照组,抗体治疗组可减少仔猪死亡率分别为67.7个百分点、57.0个百分点和77.5个百分点。

关键词： 猪流行性腹泻病毒 卵黄抗体 制备 应用

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鸡MHCⅠα和β2m链基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

戴银; 胡晓苗; 赵瑞宏; 侯宏艳; 沈学怀; 潘孝成; 周学利; 张丹俊; 《中国畜牧兽医 》 2016 北大核心

摘要：为进一步研究主要组织相容性复合体Ⅰ类(major histocompatibility complex,MHCⅠ)分子在免疫应答中的作用机制,试验经PCR克隆获得MHCⅠα和β_2m链基因,随后插入带有荧光标签蛋白的真核表达载体,成功构建了重组质粒pEGFP-MHCⅠα和pmCherry-MHCⅠβ_2m,并通过脂质体法转染293T真核表达细胞。荧光显微镜观察可见,MHCⅠα和β_2m分子主要分布于真核细胞的内膜系统,改变了与之融合的荧光蛋白在细胞内的定位。此外,Western blotting检测可见大小约68.3和41.3ku的目的蛋白反应带,表明重组质粒能够在293T细胞中顺利表达,且表达蛋白与鸡MHCⅠ类分子的相应抗体可发生特异性结合反应,具有良好的免疫学活性。

关键词： 鸡MHCⅠα基因 鸡MHCⅠβ2m链基因 真核表达载体 293T细胞

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猪流行性腹泻病毒SD株的分离与鉴定

潘孝成; 赵瑞宏; 沈学怀; 钱坤; 胡晓苗; 周学利; 戴银; 侯宏艳; 张丹俊; 《养猪 》 2015

摘要：利用Vero细胞自安徽合肥腹泻仔猪小肠内容物中分离到一株病毒,经胶体金、PCR方法和攻毒试验,确定为猪流行性腹泻病毒,命名为SD株。SD株在Vero细胞上传代,第8代(F8)开始出现稳定的细胞病变(CPE),F8代的毒价(TCID50)为10-6.25/0.1 m L,F8代细胞培养物接种未吃初乳仔猪,接种仔猪均出现典型腹泻症状,死亡仔猪3头(50%),未死亡猪生长严重发育不良,说明SD株具有较强的致病性。

关键词： 猪流行性腹泻病毒 病毒分离 鉴定

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鸭坦布苏病毒对产蛋鸡的致病性研究

张丹俊; 沈学怀; 赵瑞宏; 戴银; 胡晓苗; 潘孝成; 侯宏艳; 周学利; 朱传民; 《中国家禽 》 2015 北大核心

摘要：为探明鸭坦布苏病毒对产蛋鸡的致病性和不同感染途径对其产蛋性能的影响,分别选用罗曼蛋鸡、海兰蛋鸡和淮南麻黄鸡3个品种进行人工接种病毒试验。结果表明,3个品种产蛋鸡接种病毒后均出现产蛋下降,产蛋率最高下降80%以上,除产蛋和早期采食量下降及后期严重脱羽外,感染鸡无其他临床症状,产蛋恢复的速度和程度不同品种间存在一定差异,感染后无鸡只死亡;滴鼻组和同居组鸡群产蛋下降和恢复的程度低于肌肉注射组,重复感染组未发生明显产蛋下降;剖检病变可见一致的卵巢组织出血、变性、坏死和萎缩,其他器官无肉眼可见病变;从感染鸡卵巢组织中可检测到鸭坦布苏病毒核酸。综上所述,鸭坦布苏病毒对不同品种产蛋鸡均具有致病性,主要引发产蛋下降,病毒在鸡群中的传播可能不仅限于吸血昆虫,空气传播感染也是其重要的传播途径;感染康复鸡只对再次感染具有一定的抵抗力。研究结果为产蛋鸡不明原因产蛋下降提供了新的诊断方向,为坦布苏病毒病的有效防控发出了预警信号。

关键词： 鸭坦布苏病毒 产蛋鸡 致病性 临床症状 剖检病变

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鹅源鸭疫里默菌的分离鉴定与药敏试验

胡晓苗; 戴银; 沈学怀; 赵瑞宏; 侯宏艳; 潘孝成; 周学利; 张丹俊; 朱传明; 《中国兽医杂志 》 2015 北大核心

摘要：鹅传染性浆膜炎是由鸭疫里默菌(Riemerella anatipesifer,RA)引起鹅的以纤维蛋白渗出并在脏器表面沉积,胸、腹腔大量积液为特征的一种接触传染性疾病,其特征是纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、干酪型输卵管炎和脑膜炎。2~8周龄鹅多发,发病率90%,死亡率10%~40%,给养鹅业造成很大经济损失。国内有关鹅传染性浆膜炎研究比较少,胡清海"~([1])研究表明,2株鹅源RA分离株对

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番鸭细小病毒VP3基因克隆和序列分析

张丹俊; 戴银; 沈学怀; 赵瑞宏; 胡晓苗; 侯宏艳; 潘孝成; 周学利; 《动物医学进展 》 2015 北大核心 CSCD

摘要：为研究番鸭细小病毒基因遗传变异特征,通过PCR技术获得了番鸭细小病毒结构蛋白基因VP3序列AH-MDPV-VP3,并将该序列与GenBank数据库中登录的9条番鸭、鹅和鸭细小病毒基因相应序列进行了比对分析。测序结果可见番鸭细小病毒VP3基因全长1 605bp,编码534个氨基酸。氨基酸序列同源性和进化分析表明AH-MDPV-VP3与国内两个番鸭细小病毒基因KC171936和KM093740同源性较高,分别为100%和98.3%,且三者之间亲缘关系较近,来源于共同祖先;而与鹅细小病毒,尤其与台湾分离的鸭细小病毒基因AY382891和AY382892同源性相对较低,分别为91.6%和90.8%,遗传距离也相对较远。同时可见番鸭、鹅和鸭细小病毒的VP3基因各自较为保守,仅有少数氨基酸发生变异。本研究初步获得番鸭细小病毒VP3基因分子特征,为下一步该基因在免疫诊断及免疫防治中的应用奠定了基础。

关键词： 番鸭细小病毒 VP3基因 序列分析

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抗番鸭细小病毒卵黄抗体的制备

赵瑞宏; 沈学怀; 戴银; 张丹俊; 胡晓苗; 侯宏艳; 潘孝成; 周学利; 《安徽农业科学 》 2015

摘要：[目的]有效预防和治疗番鸭细小病毒病。[方法]用番鸭细小病毒连续免疫产蛋母鸡3次,收集鸡蛋,并制备出高免卵黄抗体。通过琼脂扩散试验对制备的卵黄抗体进行效价测定,用雏番鸭进行中和与治疗试验。[结果]制备的卵黄抗体琼扩效价达到1∶32,能有效中和番鸭细小病毒对雏番鸭的致病性,对发病的雏番鸭有很好的治疗作用。[结论]该研究为番鸭细小病毒的预防和治疗提供了一种有效的生物制品。

关键词： 番鸭细小病毒 卵黄抗体 制备

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