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鸡MHCⅠ分子单链三聚体真核表达载体的构建和表达
《安徽农业科学 》 2017
摘要：[目的]探索主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(Major Histocompatibility Complex,MHCⅠ)提高抗原呈递效率的方法,获得具有免疫学活性的抗原肽-MHCⅠ分子单链三聚体。[方法]采用基因重组技术,通过连接肽(G4S)3将鸡新城疫病毒抗原表位短肽HN(aa346-353)与鸡MHCⅠ(B-F)分子二聚体的编码基因共价串联,构建带有绿色荧光标签蛋白的真核表达载体p EGFP-HN_(346-353)-B-Fβ2m-α。[结果]转染真核细胞293T后,荧光显微镜观察可见,重组融合蛋白HN_(346-353)-B-Fβ2m-α分子三聚体主要表达定位于真核细胞的内膜系统。Western Blot结果表明,在预期蛋白分子量大小位置有明显的特异反应带,重组蛋白与其相应抗体可发生特异性结合反应。[结论]重组质粒能够在真核细胞中表达,且融合蛋白具有良好的生物学活性。
关键词： 鸡MHC B-F分子 单链三聚体 真核表达
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番鸭细小病毒病和鹅细小病毒病的特征和防控
《畜牧与饲料科学 》 2017
摘要：番鸭细小病毒病和鹅细小病毒病已成为水禽养殖中危害比较严重的传染病,其病原分别是番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV),二者临床上常在同一地区流行,有时还会发生混合感染。鹅细小病毒病和番鸭细小病毒病临床症状类似,均表现废食和下痢等消化道症状以及呼吸困难症状,鉴别诊断有一定的难度。虽然MDPV和GPV生物学特性相似,但二者致病力却有显著差异,MDPV只感染番鸭,GPV则既可感染鹅,又可感染番鸭,采用雏禽攻毒试验,可初步区分2种病毒。2种疫病均重在预防,除了加强饲养管理外,在该病流行地区,对雏禽免疫,或者在种禽产蛋前免疫,使禽苗获得被动免疫,均可达到较好的预防效果。
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禽腺病毒AH株的分离与鉴定
《中国兽医杂志 》 2017 北大核心
摘要：为获得禽腺病毒毒株,将临床疑似Ⅰ群禽腺病毒感染病例的肝组织,通过接种SPF鸡胚进行病毒分离,用PCR方法对分离产物进行扩增,将PCR产物进行序列测定,对测定的序列在NCBI网上进行分析,结果显示,从病料可分离出病毒,用PCR方法特异性地扩增出了与设计片段大小相一致的片段,序列分析表明,分离株序列与禽腺病毒SD1-15分离株序列同源性99%,说明分离株为Ⅰ群禽腺病毒血清4型。
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鸭源新城疫病毒的分离与鉴定
《安徽农业科学 》 2017
摘要：[目的]分离并鉴定鸭源新城疫病毒。[方法]从安徽地区鸭病料中分离新城疫病毒,测定其鸡胚半数感染量(EID_(50))、鸡胚平均致死时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)。[结果]2株新城疫病毒均为强毒。通过RT-PCR技术对这2株鸭新城疫病毒的F基因进行序列测定与分析,结果发现F基因裂解位点为~(112)RRQKRF~(117),符合NDV强毒株裂解位点氨基酸序列。F基因遗传进化树分析发现,AH1株属于基因Ⅶ型,而AH2株属于基因Ⅵ型,来源于鸽源病毒。[结论]水禽新城疫病毒(NDV)的感染来源复杂,应避免将不同种类的家禽混合饲养。
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安徽种猪场仔猪猪瘟免疫效果分析
《养猪 》 2017
摘要：为了解安徽省种猪生产企业的仔猪阶段猪瘟免疫效果,选择不同地区6家种猪场,用ELISA方法,对其仔猪猪瘟一免和二免后3周左右的抗体水平进行了检测,并对其抗体阳性率、合格率和离散度等进行了分析。结果显示:在仔猪阶段,6家猪场均使用传代细胞源疫苗实施两次猪瘟免疫,首免和二免日龄分别为23~28日龄和49~60日龄。二免后的抗体阳性率均达到较高水平,为81.81%~100%。二免后的抗体合格率均较首免有明显提高,提升幅度为9.75~50个百分点,其中5家达到较高水平,为72.73%~100%,但仍有一家较低,为45.45%。各场抗体离散度稍高,为17.4%~28.87%。研究结果将为种猪场乃至其他规模猪场的猪瘟免疫提供参考和依据。
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鸡MHC Ⅰ分子单链三聚体真核表达载体的构建和表达
《安徽农业科学 》 2017
摘要：[目的]探索主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(Major Histocompatibility Complex,MHC Ⅰ)提高抗原呈递效率的方法,获得具有免疫学活性的抗原肽-MHC Ⅰ分子单链三聚体.[方法]采用基因重组技术,通过连接肽(G4S)3将鸡新城疫病毒抗原表位短肽HN(aa346-353)与鸡MHC Ⅰ(B-F)分子二聚体的编码基因共价串联,构建带有绿色荧光标签蛋白的真核表达载体pEGFP-HN346-353-B-Fβ2m-α.[结果]转染真核细胞293T后,荧光显微镜观察可见,重组融合蛋白HN346-353-B-Fβ2m-α分子三聚体主要表达定位于真核细胞的内膜系统.Western Blot结果表明,在预期蛋白分子量大小位置有明显的特异反应带,重组蛋白与其相应抗体可发生特异性结合反应.[结论]重组质粒能够在真核细胞中表达,且融合蛋白具有良好的生物学活性.
关键词： 鸡MHC B-F分子 单链三聚体 真核表达
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番鸭细小病毒安徽分离株结构蛋白基因的克隆及序列分析
《动物医学进展 》 2017 北大核心
摘要：为研究番鸭细小病毒(MDPV)安徽分离株的遗传变异特征,通过PCR扩增获得了MDPV结构蛋白(VP)基因全长序列AH-MDPV-VP,并将该序列与GenBank中登录的12条MDPV和鹅细小病毒(GPV)VP基因序列进行比对。结果显示,AH-MDPV-VP基因全长2 199bp,包括完整的VP1、VP2和VP3蛋白编码区。MDPV与GPV的VP基因部分序列一致,但具有明显的差异。进化分析显示,MDPV安徽分离株与基因重组型MDPV上海分离株SAAS-SHNH为同一分支,亲缘关系较近。同源性分析显示二者核苷酸序列同源性最高,为99.9%,且AH-MDPV-VP与GPV毒株SHFX1201的序列同源性也有89.5%。此外安徽分离株与其他MDPV的VP1、VP2和VP3基因同源性有逐步下降的趋势,而与GPV则相反呈上升趋势。进一步显示MDPV安徽分离株与基因重组型MDPV上海分离株SAAS-SHNH相似,可能为MDPV和GPV基因重组型水禽细小病毒。
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H9N2亚型禽流感疫苗株的筛选
《中国兽医杂志 》 2017 北大核心
摘要：为了筛选免疫原性更好的H9N2亚型禽流感病毒疫苗株。本研究在分析H9N2病毒HA基因遗传进化规律基础上,对预选的毒株进行血凝效价(HA)、鸡胚半数感染量(EID50)测定及交叉血凝抑制试验,筛选出疫苗用毒株进行免疫攻毒保护试验。结果显示,CK/AH/AJ3/15株HA效价达11 log2、EID50值为9.17 log10/0.1 mL,有很好的繁殖能力;对当前流行株的HI反应效价比疫苗株F/98高2-3个滴度;以CK/AH/AJ3/15株制作灭活疫苗,整体保护率达到97.5%,比F/98疫苗株的85%明显提高。表明CK/AH/AJ3/15株可以作为H9N2亚型禽流感新型疫苗株的候选株。
关键词： H9N2亚型禽流感病毒 疫苗 筛选
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一株鸭源枯草芽胞杆菌的分离鉴定及药敏试验
《畜牧与饲料科学 》 2017
摘要：为了鉴定从患鸭疫里默氏杆菌病鸭脑组织中分离到的混合感染细菌,采用常规方法观察分离菌株的菌落形态、革兰染色特征、生化反应特点,采用细菌16S rDNA PCR及序列分析方法对分离菌株进行分子生物学鉴定。结果表明,分离菌株在胰蛋白大豆肉汤培养基上形成边缘不规则,凸起,表面灰白色,粗糙的大菌落;镜检呈革兰阳性杆菌,能够产生芽胞;在兔血平板上生长时出现明显的β溶血环;生化反应特点与枯草芽胞杆菌模式株基本相符,但略有不同;其16S rDNA序列与GenBank中已经报道的枯草芽胞杆菌16S rDNA序列的相似性达到99%,最终确定分离菌株为枯草芽胞杆菌;分离菌株对红霉素、万古霉素、阿莫西林等抗菌药物敏感,对克林霉素和多西环素中等敏感,仅对头孢噻肟耐药。研究结果为临床治疗由鸭疫里默氏杆菌和枯草芽胞杆菌引起的混合感染提供了科学用药方案。
关键词： 枯草芽胞杆菌 混合感染 表型鉴定 分子生物学鉴定 药敏试验
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鸡疑似克雷伯氏杆菌病的诊断与药敏试验
《安徽农业科学 》 2017
摘要：[目的]诊断疑似患有克雷伯氏杆菌病的发病鸡群。[方法]通过采取病鸡肝脏和脑组织,接种于胰蛋白胨琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、SS琼脂培养基、兔血琼脂培养基,培养出疑似克雷伯氏杆菌菌落,革兰氏染色发现该菌属于革兰氏阴性菌,将菌落进行溶血试验和生化试验。[结果]初步判断该菌为克雷伯氏杆菌。药敏试验中发现该菌对庆大霉素、妥布霉素、恩诺沙星、阿米卡星表现较敏感;对阿莫西林、卡那霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢曲松、多黏菌素、四环素有极强的耐药性;对于红霉素、新霉素的敏感性介于两者之间。[结论]药敏试验为治疗该菌提供了大致方向,同时提醒抗生素类药物切不可滥用,以免产生耐药性。
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