科研产出
CRISPR/Cas9系统敲除山羊CDK2基因载体构建及转染效率检测
《中国草食动物科学 》 2024
摘要：细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-2（CDK2）是细胞通过和进入S期所必须的细胞周期调节激酶，与许多癌细胞的生长有关。然而，目前在山羊上关于CDK2基因敲除及相关功能的研究尚未见报道。研究采用CRISPR/cas9系统，首先设计CDK2基因的sgRNA片段，在合成CDK2 sgRNA核苷酸序列后，构建能够同时表达sgRNA和Cas9 D10A的质粒PYSY-CDK2 sgRNA，连接并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，对转化子进行验证，最后转染HEK293T细胞，检测细胞荧光和细胞增殖。酶切和测序结果证明，CDK2基因敲除载体构建正确；荧光显微镜检测显示，细胞转染效率在75%以上；细胞增殖检测表明，山羊CDK2敲除质粒不会对人源细胞增殖产生影响。说明采用CRISPR/Cas9构建的载体，可为后续获得山羊CDK2基因缺失型细胞系，研究支原体肺炎感染引发的细胞凋亡分子机制提供理论依据。
关键词： CRISPR/Cas9 山羊 CDK2 基因敲除
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绵羊Izumo1基因多态性及其与产羔数关联分析
《中国农业大学学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：为研究Izumo1基因多态性及与产羔数关系,本研究利用PCR和直接测序法对小尾寒羊和苏尼特羊的Izumo1基因DNA序列进行扩增、测序和BLAST分析,并和本课题组前期绵羊重测序数据进行比对,筛选出Izumo1基因SNP位点。同时,采用Sequenom MassARRAY~?技术进行基因分型,并对其SNP位点的基因型和等位基因频率在各群体中的分布进行研究。结果表明:小尾寒羊Izumo1基因DNA全长序列3 385 bp,苏尼特羊Izumo1基因DNA全长序列3 382 bp;筛选出8个Izumo1基因SNP位点,经过初步筛选,将在小尾寒羊、苏尼特羊、滩羊、萨福克羊、杜泊羊、草原藏羊这6个绵羊品种中位点分布没有差异的SNP位点排除,最终筛选获得的g.54412135A>G和g.54412107C>A 2个位点。Izumo1基因g.54412135A>G位点在多羔和单羔绵羊品种中存在GG、GA和AA 3种基因型,G基因为优势等位基因;g.54412107C>A在多羔品种中存在CC和CA 2种基因型,而在单羔品种中存在CC、CA和AA 3种基因型,C基因为优势等位基因,其基因型频率和基因频率在单、多羔绵羊群体间的分布差异均极显著(P<0.01);群体遗传学分析得出g.54412135A>G多态位点在6个品种中的多态信息含量(PIC)都属于低度多态(PIC<0.25);g.54412107C>A多态位点在杜泊羊中属于中度多态(0.25
关键词： 绵羊 Izumo1基因 克隆 多态性 SNP 产羔数
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GLIS1基因表达与绵羊产羔数之间关系的研究
《中国草食动物科学 》 2020
摘要：为探究GLIS1基因表达水平与绵羊产羔数之间的关系,利用半定量RT-PCR(Semi-quantitative RT-PCR,sqRT-PCR)和实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)技术检测了绵羊GLIS1基因在不同产羔能力绵羊各组织中的表达情况.结果表明:GLIS1基因在多羔小尾寒羊输卵管高表达,在单羔苏尼特羊卵巢、输卵管、子宫体以及子宫角中的表达量均高于多羔小尾寒羊(P>0.05);GLIS1基因B+基因型在各组织中的表达量均极显著高于BB基因型和++基因型(P<0.01).综上得出,GLIS1基因可能通过调控其mRNA表达水平对绵羊产羔数发挥负调控作用.
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绵羊CD9基因g.208082881C>A位点多态性与产羔数的关联分析
《中国草食动物科学 》 2018
摘要：为了探究绵羊CD9基因g.208082881C>A位点多态性与产羔数之间的关系,利用Sequenom Mass ARRAYR~SNP技术对多羔绵羊品种(小尾寒羊380只)和单羔绵羊品种(滩羊、苏尼特羊、萨福克羊、杜泊羊和草原藏羊共380只)CD9基因g.208082881C>A位点多态性进行了检测,并与产羔数进行关联分析。结果表明:CD9基因g.208082881C>A位点存在AA和CA两种基因型,A基因为优势等位基因,等位基因频率在单羔、多羔绵羊品种间差异达到极显著水平(P<0.01);群体遗传学分析表明,该位点在杜泊羊群体中表现为低度多态(PIC<0.25),而在其他绵羊品种中均为中度多态(0.25
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精卵融合相关基因CD9和CD81在绵羊组织中的表达分析
《农业生物技术学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：CD9和CD81是哺乳动物精卵融合重要的候选因子,其在机体内组织表达情况尚不清楚。为了初步探讨CD9和CD81基因在绵羊(Ovis aries)组织中的表达情况,本研究利用半定量反转录-聚合酶链式反应(semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,sqRT-PCR)和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术对两个基因在卵泡期小尾寒羊(高繁殖力)和苏尼特羊(低繁殖力)各组织中的表达进行了比较分析。结果表明,CD9和CD81基因在两种绵羊的14种组织中均有表达;CD9基因表达量在两个品种绵羊输卵管组织中都最高,且在小尾寒羊下丘脑、垂体和卵巢组织中的表达都极显著高于苏尼特羊(P<0.01);在小尾寒羊卵巢和下丘脑组织中的表达显著高于垂体和子宫(P<0.05),在苏尼特羊下丘脑和子宫组织中的表达显著高于卵巢和垂体(P<0.05)。CD81基因在小尾寒羊繁殖轴组织中的表达均极显著高于苏尼特羊(P<0.01);CD81基因表达量在小尾寒羊下丘脑组织中最高(P<0.01),在垂体和输卵管组织中的表达极显著高于卵巢和子宫(P<0.01);CD81基因表达量在苏尼特羊卵巢组织中最高(P<0.01),在下丘脑组织中的表达极显著高于垂体、输卵管和子宫(P<0.01)。研究结果提示CD9和CD81基因可能与绵羊繁殖力有关,为初步揭示绵羊繁殖性能的分子调控机制提供了参考。
关键词： 绵羊 精卵融合 CD9基因 CD81基因 组织表达
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山羊繁殖季节性相关基因DIO2与DIO3的表达分析
《农业生物技术学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：研究表明,2型脱碘酶基因(typeⅡiodothyronine deiodinase gene,DIO2)和3型脱碘酶基因(typeⅢiodothyronine deiodinase gene,DIO3)对啮齿动物(Rodentia)和绵羊(Ovis aries)的季节性繁殖活动具有重要调控作用。本研究选择常年发情济宁青山羊(Capra hircus)和季节性发情辽宁绒山羊(C.hircus)作为实验对象,应用反转录PCR和定量PCR技术分别对两个基因的组织表达谱及繁殖轴组织中两个基因的表达差异进行检测分析。研究发现,(1)DIO2基因在所研究的24个组织都有一定量表达,DIO3基因主要在小脑、海马、下丘脑、垂体、脑桥以及卵巢和肾上腺等表达,品种间两基因组织表达谱相似;(2)济宁青山羊垂体DIO2基因表达量显著高于辽宁绒山羊(P<0.05),下丘脑、卵巢表达量也均高于辽宁绒山羊,但两品种间差异不显著(P>0.05),子宫表达量显著低于辽宁绒山羊(P<0.05);(3)对于下丘脑组织DIO3基因,则济宁青山羊表达量比辽宁绒山羊明显要高(P<0.05),而对于卵巢和子宫DIO3基因表达量,则济宁青山羊明显比辽宁绒山羊低(P<0.05),济宁青山羊垂体DIO3基因表达量低于辽宁绒山羊,但两品种间差异不显著(P>0.05)。本研究提示DIO2和DIO3基因可能与山羊季节性繁殖调控有关,研究结果可为初步揭示山羊繁殖季节性分子调控机制提供参考。
关键词： 繁殖季节性 2型脱碘酶基因(DIO2) 3型脱碘酶基因(DIO3) 表达 山羊
山羊繁殖季节性相关基因KiSS-1与RFRP的表达研究
《畜牧兽医学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：本研究为初步阐明KiSS-1和RFRP基因对山羊繁殖季节性的作用,选择常年发情济宁青山羊和季节性发情辽宁绒山羊为对比品种,应用RT-PCR和qRT-PCR技术分别研究KiSS-1和RFRP基因组织表达谱以及在下丘脑-垂体-卵巢(子宫)繁殖轴表达差异。结果发现:(1)KiSS-1基因主要表达于山羊下丘脑、垂体、松果体、肾、卵巢、脂肪和甲状腺等组织,RFRP基因主要表达于山羊下丘脑、大脑皮层、小脑、卵巢和垂体等组织,两基因组织表达谱均存在一定的品种特异性;(2)KiSS-1基因在济宁青山羊下丘脑表达量显著高于辽宁绒山羊(P<0.05),而在垂体和卵巢中的表达量两品种间差异不明显(P>0.05);(3)济宁青山羊下丘脑RFRP基因表达显著高于辽宁绒山羊(P<0.05),而济宁青山羊卵巢和垂体中RFRP基因表达明显低于辽宁绒山羊(P<0.05)。研究结果提示,KiSS-1基因可能参与调控山羊季节性繁殖,而RFRP基因是否调控季节性繁殖或以何种方式作用还需要进一步研究。本研究可为山羊KiSS-1和RFRP基因功能研究打下基础,并为揭示山羊繁殖季节性的遗传基础提供参考。
