科研产出
CRISPR/Cas9系统敲除山羊CDK2基因载体构建及转染效率检测
《中国草食动物科学 》 2024
摘要：细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶-2（CDK2）是细胞通过和进入S期所必须的细胞周期调节激酶，与许多癌细胞的生长有关。然而，目前在山羊上关于CDK2基因敲除及相关功能的研究尚未见报道。研究采用CRISPR/cas9系统，首先设计CDK2基因的sgRNA片段，在合成CDK2 sgRNA核苷酸序列后，构建能够同时表达sgRNA和Cas9 D10A的质粒PYSY-CDK2 sgRNA，连接并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，对转化子进行验证，最后转染HEK293T细胞，检测细胞荧光和细胞增殖。酶切和测序结果证明，CDK2基因敲除载体构建正确；荧光显微镜检测显示，细胞转染效率在75%以上；细胞增殖检测表明，山羊CDK2敲除质粒不会对人源细胞增殖产生影响。说明采用CRISPR/Cas9构建的载体，可为后续获得山羊CDK2基因缺失型细胞系，研究支原体肺炎感染引发的细胞凋亡分子机制提供理论依据。
关键词： CRISPR/Cas9 山羊 CDK2 基因敲除
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山羊繁殖季节性相关基因DIO2与DIO3的表达分析
《农业生物技术学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：研究表明,2型脱碘酶基因(typeⅡiodothyronine deiodinase gene,DIO2)和3型脱碘酶基因(typeⅢiodothyronine deiodinase gene,DIO3)对啮齿动物(Rodentia)和绵羊(Ovis aries)的季节性繁殖活动具有重要调控作用。本研究选择常年发情济宁青山羊(Capra hircus)和季节性发情辽宁绒山羊(C.hircus)作为实验对象,应用反转录PCR和定量PCR技术分别对两个基因的组织表达谱及繁殖轴组织中两个基因的表达差异进行检测分析。研究发现,(1)DIO2基因在所研究的24个组织都有一定量表达,DIO3基因主要在小脑、海马、下丘脑、垂体、脑桥以及卵巢和肾上腺等表达,品种间两基因组织表达谱相似;(2)济宁青山羊垂体DIO2基因表达量显著高于辽宁绒山羊(P<0.05),下丘脑、卵巢表达量也均高于辽宁绒山羊,但两品种间差异不显著(P>0.05),子宫表达量显著低于辽宁绒山羊(P<0.05);(3)对于下丘脑组织DIO3基因,则济宁青山羊表达量比辽宁绒山羊明显要高(P<0.05),而对于卵巢和子宫DIO3基因表达量,则济宁青山羊明显比辽宁绒山羊低(P<0.05),济宁青山羊垂体DIO3基因表达量低于辽宁绒山羊,但两品种间差异不显著(P>0.05)。本研究提示DIO2和DIO3基因可能与山羊季节性繁殖调控有关,研究结果可为初步揭示山羊繁殖季节性分子调控机制提供参考。
关键词： 繁殖季节性 2型脱碘酶基因(DIO2) 3型脱碘酶基因(DIO3) 表达 山羊
山羊繁殖季节性相关基因KiSS-1与RFRP的表达研究
《畜牧兽医学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：本研究为初步阐明KiSS-1和RFRP基因对山羊繁殖季节性的作用,选择常年发情济宁青山羊和季节性发情辽宁绒山羊为对比品种,应用RT-PCR和qRT-PCR技术分别研究KiSS-1和RFRP基因组织表达谱以及在下丘脑-垂体-卵巢(子宫)繁殖轴表达差异。结果发现:(1)KiSS-1基因主要表达于山羊下丘脑、垂体、松果体、肾、卵巢、脂肪和甲状腺等组织,RFRP基因主要表达于山羊下丘脑、大脑皮层、小脑、卵巢和垂体等组织,两基因组织表达谱均存在一定的品种特异性;(2)KiSS-1基因在济宁青山羊下丘脑表达量显著高于辽宁绒山羊(P<0.05),而在垂体和卵巢中的表达量两品种间差异不明显(P>0.05);(3)济宁青山羊下丘脑RFRP基因表达显著高于辽宁绒山羊(P<0.05),而济宁青山羊卵巢和垂体中RFRP基因表达明显低于辽宁绒山羊(P<0.05)。研究结果提示,KiSS-1基因可能参与调控山羊季节性繁殖,而RFRP基因是否调控季节性繁殖或以何种方式作用还需要进一步研究。本研究可为山羊KiSS-1和RFRP基因功能研究打下基础,并为揭示山羊繁殖季节性的遗传基础提供参考。
山羊肺泡巨噬细胞分离培养及脂多糖诱导形态学观察
《中国草食动物科学 》 2014
摘要：肺泡巨噬细胞是宿主天然免疫和特异性免疫的重要执行者。目前关于山羊肺泡巨噬细胞体外分离培养的方法尚未见报道。文章从健康无病变的羔羊肺脏灌洗液中分离肺泡巨噬细胞,并加50μg/mL的脂多糖进行诱导刺激。结果显示:肺泡巨噬细胞分离纯度较高,不发生增殖,体外可维持30 d左右,经脂多糖诱导细胞出现聚集和增大现象。表明山羊肺泡巨噬细胞体外维持时间较长,脂多糖诱导实验初步证实其具备免疫学功能,为进一步利用山羊肺泡巨噬细胞进行免疫学机制研究和疾病治疗提供了依据。
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山羊同期发情处理后发情、LH峰及排卵时间间隔的研究
《中国草食动物 》 2010
摘要：试验比较了16-次甲基甲地孕酮(MGA)和氟孕酮(FGA)对安徽白山羊进行同期发情处理后发情、LH峰值及排卵的时间间隔.结果表明:MGA处理组开始发情的时间(80.6 h±3.5 h)较FGA处理组(41.3 h±1.3 h)长,而且差异极显著(P＜0.01);同情发情处理结束到LH峰出现、到排卵以及LH峰出现到排卵的时问间隔,MGA组为93.5 h±2.2 h、117.9 h±2.9 h和24.4 h±1.1 h,FGA组为55.5 h±2.3 h、76.4 h±1.5 h和20.8h±0.7 h,两组间差异均达显著水平(P＜0.05);同期发情处理结束后开始发情到LH峰出现的时间间隔、开始发情到排卵的时间间隔以及血清LH峰持续时间MGA组、FGA组分别为:13.9 h±1.4 h和14.3 h±0.8 h、37.3 h±2.1 h和35.0 h±0.5 h、12.0 h±0.6 h和12.6 h±0.3 h,两组间差异均不显著.
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