科研产出
猪流行性腹泻病毒N-E.coli OmpA融合基因构建、表达及其免疫原性评价
《养猪 》 2022
摘要：为获得免疫原性更强的猪流行性腹泻病毒（PEDV）结构蛋白，试验将PEDV N蛋白基因和大肠杆菌（E.coli）OmpA蛋白基因进行融合，采用柔性linker联接，得到OmpA-linkerPEDV N融合基因，并克隆至pCold I质粒，构建重组质粒p Cold I-OmpA-linker-PEDV N。重组质粒转入BL21感受态细胞，SDS-PAGE分析重组质粒的表达，并对其编码的融合蛋白进行二级和三级结构预测。Western-blot和ELISA分析融合蛋白的免疫原性。结果表明：构建了融合基因表达质粒pCold I-OmpA-linker-PEDV N，表达了约88 ku的融合蛋白；融合蛋白的二级结构未发生明显变化，三级结构预测可折叠为正确的空间构像。该融合蛋白同时具有PEDV N蛋白和OmpA蛋白的免疫原性，并且其免疫原性显著高于单一PEDV N蛋白。说明试验获得了免疫原性较好的融合基因表达蛋白，可以为PEDV N蛋白功能研究、特异性抗体制备以及PEDV亚单位疫苗的研制提供材料和研究基础。
关键词： PEDV N基因 E.coli OmpA基因 基因融合 基因表达 免疫原性
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酸枣愈伤组织转化体系构建及在ZjBRC1调控ZjYUCCA表达中的应用
《园艺学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：以来源于同一株酸枣实生苗的茎段、叶片、子叶和胚轴等组织为外植体试材,筛选到适合子叶、胚轴和叶片诱导愈伤组织的培养基为MS+1.0 mg·L-12,4-D+0.4 mg.L-1 TDZ;利用农杆菌介导法,当浸染液浓度OD600为0.6~0.8、浸染时间为30 min时,酸枣叶片、子叶、胚轴和茎段愈伤组织遗传转化率分别为31.8%、25.6%、24.5%和23.8%.利用叶片诱导的愈伤组织转化体系,获得了调控分枝发育关键因子ZjBRC1融合表达嵌合抑制子SRDX和35S∶∶GFP空载体对照的转基因愈伤组织.荧光定量qRT-PCR分析显示,与35S∶∶GFP转基因愈伤组织相比,ZjBRC1-SRDX下调生长素合成基因ZjYUCCA7/10-3/10-4的表达,而上调ZjYUCCA2/4/6表达.综上,本研究中建立和优化了枣愈伤组织诱导和转化体系.
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褪黑激素对长毛兔毛囊细胞凋亡的影响
《湖南农业大学学报(自然科学版) 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为研究褪黑激素对皖系长毛兔毛囊细胞凋亡的影响及相关机制,选择60只皖系长毛兔,随机均分成4组,1组不埋植褪黑激素(对照),另3组每只兔按25 mg(低剂量组)、40 mg(中剂量组)和55 mg(高剂量组)分别埋植褪黑激素,饲养70 d后,进行组织病理学观察和RNA的转录组高通量测序及q PCR表达分析。结果表明:通过组织切片观察,证实55 mg褪黑激素处理能有效抑制毛囊细胞凋亡,维持细胞正常形态;通过对高剂量组和对照组测序,得到25个差异表达基因,其中有14个基因上调,11个基因下调,涉及通路包括嗜T细胞病毒感染、坏死性凋亡、甲状腺癌、铁死亡、I型糖尿病和胰岛素信号通路,其中坏死性凋亡、铁死亡通路与长毛兔毛囊凋亡相关;选取4个与凋亡相关的差异表达基因进行荧光定量验证,得到新基因MSTRG.3561表达显著上调,SLC25A5表达下调,但差异无统计学意义。
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猪CD8B表达谱、基因多态性及其与血液免疫性状的关联分析
《农业生物技术学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：白细胞分化抗原8(cluster of differentiation 8,CD8)是主要表达在CD8+T细胞表面的共受体和信号转导分子。CD8B基因编码CD8蛋白的β链,在免疫应答中起着潜在的调节作用。为分析CD8B基因在猪(Sus scrofa)不同组织中的表达特征,并探究CD8B基因多态性对血液免疫性状的遗传效应,本研究利用q RT-PCR测定CD8B基因在大白猪7个组织中的表达量,并用PCR产物测序与限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)方法对382头大白猪、84头长白猪和90头松辽黑猪CD8B基因编码区进行SNPs检测,以及分析CD8B基因突变对大白猪外周血T淋巴细胞亚群和血常规指标的影响。结果表明,CD8B基因在脾脏中的m RNA表达量最高,然后依次是肺脏、胃、肝脏、肾脏、心脏和肌肉。CD8B基因外显子5处检测到1个错义突变(c.602G>A),在大白猪、长白猪和松辽黑猪群中均存在3种基因型(AA、AG和GG型),且3个猪种都是GG为优势基因型。统计分析显示,CD8B基因多态性与大白猪血液中的CD4+CD8-、CD4-CD8+、CD4+/CD8+、血红蛋白含量(hemoglobin,HGB)和红细胞压积(hematocrit,HCT)指标显著相关(P<0.05)。最小二乘分析表明,3种CD8B基因型个体具有不同的血液参数,其中GG型的CD4+CD8-指标显著高于AG型,AG型的CD4-CD8+指标显著高于GG和AA型,GG和AA型的CD4+/CD8+、HGB和HCT指标显著高于AG型(P<0.05)。因此,CD8B基因可能参与血液生理指标的调控,可作为影响猪免疫性状的重要功能候选基因。本研究为进一步揭示CD8B基因的生物学功能提供依据,也为猪的标记辅助抗病育种提供了基础资料。
关键词： 猪 白细胞分化抗原8B基因(CD8B) 基因表达 SNP 血液免疫指标
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茶树β-葡萄糖苷酶研究进展
《茶叶科学 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：茶树体内的各种物质代谢、能量传递以及生长发育等都必须有酶的参与,而且酶对茶叶品质的形成具有重要意义。β-葡萄糖苷酶能够催化茶树糖苷类香气前体的水解反应,产生的茶树香气物质不仅参与茶树对病虫害的防御反应,还是茶叶重要的物质基础。茶树β-葡萄糖苷酶基因在表达部位、亚细胞定位、蛋白结构及系统发育进化等生物信息学方面,与拟南芥、水稻、玉米等植物的β-葡萄糖苷酶基因家族都存在相似性。在非生物和生物逆境胁迫下,茶树β-葡萄糖苷酶基因表达在逆境初期均呈现上调。本文将主要围绕茶树β-葡萄糖苷酶基因生物信息学及基因表达等研究现状,结合β-葡萄糖苷酶在茶叶加工中的变化作一概述。
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藏猪内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因的表达与低氧适应分析
《中国农业大学学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为了解内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在动物体内催化产生一氧化氮(NO),对动物低氧适应的重要作用,选取饲养在西藏林芝地区(海拔约3 000m)的藏猪、大约克猪(高原大约克猪)和饲养在北京(海拔约100m)的大约克猪(低地大约克猪),屠宰并采集心肌、肝脏和肺脏组织,采用荧光定量PCR技术测定eNOS基因的表达量。结果发现,高原藏猪、大约克猪和低地大约克猪在肝脏和肺脏中eNOS的总体表达量分别比心脏中要高1 000和400倍;在心脏中,高原藏猪和高原大约克猪eNOS基因的表达量均高于低地大约克猪的4.0和2.6倍(P<0.01),但是在肝脏和肺脏中的表达量却相反。大约克猪从低地移居高原,心肌组织eNOS表达量增加了2.6倍,但肝脏和肺脏组织中eNOS表达量分别下降了1.6和1.1倍。结果表明,藏猪eNOS基因表达量与低地大约克猪和移居高原的大约克猪存在差异,且在心肌、肝脏和肺脏组织表现不同,可能对其低氧适应起不同的调节作用。
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