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猪流行性腹泻病毒N-E.coli OmpA融合基因构建、表达及其免疫原性评价

文献类型： 中文期刊

作者： 沈学怀 1 ; 汪洁茹 1 ; 尹磊 1 ; 周学利 1 ; 赵瑞宏 1 ; 潘孝成 1 ; 戴银 1 ; 殷冬冬 1 ; 张丹俊 1 ; 胡晓苗 1 ; 侯宏艳 1 ;

作者机构： 1.安徽省农业科学院畜牧兽医研究所安徽省畜禽疫病研究中心

关键词： PEDV N基因;E.coli OmpA基因;基因融合;基因表达;免疫原性

期刊名称： 养猪

ISSN： 1002-1957

年卷期： 2022 年 003 期

页码： 115-120

摘要： 为获得免疫原性更强的猪流行性腹泻病毒（PEDV）结构蛋白，试验将PEDV N蛋白基因和大肠杆菌（E.coli）OmpA蛋白基因进行融合，采用柔性linker联接，得到OmpA-linkerPEDV N融合基因，并克隆至pCold I质粒，构建重组质粒p Cold I-OmpA-linker-PEDV N。重组质粒转入BL21感受态细胞，SDS-PAGE分析重组质粒的表达，并对其编码的融合蛋白进行二级和三级结构预测。Western-blot和ELISA分析融合蛋白的免疫原性。结果表明：构建了融合基因表达质粒pCold I-OmpA-linker-PEDV N，表达了约88 ku的融合蛋白；融合蛋白的二级结构未发生明显变化，三级结构预测可折叠为正确的空间构像。该融合蛋白同时具有PEDV N蛋白和OmpA蛋白的免疫原性，并且其免疫原性显著高于单一PEDV N蛋白。说明试验获得了免疫原性较好的融合基因表达蛋白，可以为PEDV N蛋白功能研究、特异性抗体制备以及PEDV亚单位疫苗的研制提供材料和研究基础。

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