栝楼的RAPD-PCR体系建立与优化

曲益涛; 董玲; 江芹; 宁志怨; 廖华俊; 《安徽农业科学 》 2010 北大核心

摘要：[目的]建立栝楼的RAPD-PCR体系并对该体系进行优化。[方法]以栝楼叶片为材料,采用CTAB法提取栝楼叶片基因组DNA,利用正交设计对RAPD-PCR体系进行优化。[结果]各因素水平变化对PCR反应影响大小依次为:Mg2+、TaqDNA聚合酶、引物和dNTPs。通过试验分析,优化的栝楼RAPD反应体系为:在25μl反应体系中,含10×buffer2.5μl,Mg2+2.0mmol/L,Taq酶1U,引物0.8μmol/L,dNTPs0.1mmol/L。反应程序为94℃预变性2mim;94℃变性30s,37℃退火温度40s,72℃延伸1.5mim,36次循环;72℃延伸10mim,4℃保存。[结论]该研究建立的栝楼RAPD反应体系稳定可靠,为栝楼性别鉴定、遗传多样性分析、亲缘关系分析等方面的研究提供了有效的方法。

关键词： 栝楼 RAPD 分子标记 优化