文献类型: 中文期刊
作者: 殷冬冬 1 ; 白彩霞 1 ; 唐井玉 1 ; 张成 2 ; 王瑞 3 ;
作者机构: 1.安徽农业大学动物科技学院
2.安徽农业大学动物科技学院中国农业科学院上海兽医研究所
3.安徽省农业科学院作物研究所
关键词: Nectin-4基因;原核表达;多克隆抗体
期刊名称: 扬州大学学报(农业与生命科学版)
ISSN: 1671-4652
年卷期: 2016 年 37 卷 03 期
页码: 6-10
收录情况: 北大核心
摘要: 根据Nectin-4基因序列设计特异性引物,进行PCR扩增,将其克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,经PCR、酶切和测序鉴定,成功构建了重组表达质粒pGEX-4T-Nectin-4。将重组质粒转化大肠埃希氏菌Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导表达目的蛋白。表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定正确后,纯化后免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体血清,并利用琼脂扩散试验检测其效价。SDS-PAGE结果表明该重组蛋白获得高效表达,表达的蛋白以包涵体形式存在。Western blot结果表明表达的蛋白能与GST单抗发生反应,具有较好的反应原性。琼脂扩散试验结果表明制备的抗Nectin-4蛋白多克隆抗体效价达1∶8。由于Nectin-4是小反刍兽疫病毒新近发现的受体,这一研究为后续Nectin-4与小反刍兽疫病毒的相互作用研究奠定了一定基础。
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