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转基因大豆CAL16转化体特异性定量检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 王沛然 1 ; 陆佳雨 1 ; 许学 1 ; 吴爽 1 ; 李晨 1 ; 胡笑林 1 ; 潘伟芹 1 ; 汪秀峰 1 ;

作者机构： 1.安徽省农业科学院水稻研究所

关键词： 转基因大豆;CAL16;转化体特异性;定量检测;不确定度

期刊名称： 中国油料作物学报

ISSN： 1007-9084

年卷期： 2025 年 47 卷 004 期

页码： 1036-1050

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以杭州瑞丰生物科技有限公司研发的转Cry1Ab/Vip3Da基因抗虫大豆，即转基因大豆CAL16为材料，建立CAL16转化体特异性定量PCR检测方法，旨在给我国CAL16及其衍生品系的生物育种产业化提供技术支撑。根据5′端和3′端旁侧序列设计引物探针组合，筛选出5′端一对最佳引物组合，PCR产物片段大小为112 bp。经特异性测试、标准曲线的建立、正确度和精密度测试、检出限和定量限测试、稳健性测试、微滴式数字PCR验证，该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。检出限达到0.025%，相当于10个拷贝的CAL16特异性片段；定量限达到0.1%，约为40个拷贝。实验室间循环验证显示：该方法符合国家标准方法各项要求，可满足检测需求。最终对CAL16定量方法进行不确定度评定，确保量值科学可靠，满足定量标识的需求。

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