根癌农杆菌介导的水稻转基因技术体系的优化

李笑寒; 李莉; 宋风顺; 倪大虎; 陆徐忠; 李浩; 段永波; 汪秀峰; 杨剑波; 《生物学杂志 》 2011 CSCD

摘要：对根癌农杆菌介导水稻遗传转化的各重要因素逐一分析,比较不同基因型、培养基成份、光照、继代次数、菌液浓度、侵染时间、干燥情况等因素对遗传转化的影响。通过培养条件的优化,建立了一个高效的水稻转化技术体系。研究结果表明,相比较于暗培养,光照培养进行愈伤诱导可以使诱导天数缩短4~5d;诱导培养基中加入适量的激素可以使籼稻愈伤诱导提高25%~30%;分化培养基中加入适量的氨基酸和甘露醇可以使植株再生频率提高15%~20%。

关键词： 水稻 根癌农杆菌 遗传转化

 全文链接 请求原文

分子标记辅助改良杂交稻协优57及其父母本的蒸煮食味品质

许勇; 倪大虎; 陆徐忠; 宋丰顺; 张士陆; 陈圣; 王宗阳; 蔡秀玲; 李泽福; 汪秀峰; 李莉; 杨剑波; 《生物学杂志 》 2011 CSCD

摘要：协优57是一个产量高和适应性强的杂交中籼组合,但由于其父母本直链淀粉含量(AC)高,导致杂交稻米的AC较高、蒸煮食味品质较差。先前利用PCR-AccⅠ分子标记辅助选择对协优57的亲本057[恢复系,记作057(GG)]和协青早A[不育系,记作协A(GG)]的W x基因进行改良。利用改良前、后的各亲本分别配组,分析不同组合的AC、食味品质和颗粒性淀粉结合酶(GBSS)活性。结果表明,改良单亲的GT型组合协A(GG)×057(TT)、协A(TT)×057(GG)杂交稻米的AC由原组合协A(GG)×057(GG)的28%分别降到19.9%和19.3%,但均一性较差。改良双亲的TT纯合型组合协A(TT)×057(TT)的杂交稻米,不仅AC降到中等偏低水平(13.1%),而且AC的均一性也有了很大的提高,蒸煮食味品质明显改善。GBSS活性分析表明:三种W x基因型的GBSS活性总体表现为GG>GT>TT。

关键词： PCR-AccⅠ分子标记 杂交稻米 直链淀粉含量 蒸煮食味品质 颗粒性淀粉结合酶 快速粘度测定仪

 全文链接 请求原文

转基因耐除草剂大豆A2704-12定性PCR检测方法研究

马卉; 汪秀峰; 李莉; 陆徐忠; 倪大虎; 杨剑波; 《分子植物育种 》 2011 CSCD

摘要：本研究建立了转基因耐除草剂大豆A2704-12定性PCR检测方法。根据A2704-12转化体外源插入片段5'端与大豆基因组连接区序列设计特异性引物,以大豆内源基因Lectin为内标,从A2704-12转化体中特异性扩增出239bp大小的特异性目的片段。同时对该方法特异性和灵敏度进行测试,结果显示:该方法能检测出A2704-12转化体中的特异性DNA片段;其检测灵敏度可达到0.05%。本文建立的方法特异性强,灵敏度高,可为今后转基因耐除草剂大豆A2704-12的市场监管提供技术支撑。

关键词： 转基因作物 耐除草剂大豆A2704-12 转化体特异性PCR

 全文链接 请求原文

分子标记辅助培育水稻抗白叶枯病和稻瘟病三基因聚合系

倪大虎; 易成新; 李莉; 汪秀峰; 张毅; 赵开军; 王春连; 章琦; 王文相; 杨剑波; 《作物学报 》 2008 北大核心 CSCD

摘要：水稻的白叶枯病和稻瘟病是水稻的两大主要病害,通过分子标记辅助选择与传统的杂交、自交相结合的方法,将抗稻瘟病的Pi9(t)基因和抗白叶枯病的Xa21及Xa23基因聚合到同一株系中,经多代大田或/和温室接菌鉴定、室内标记选择和田间农艺性状的筛选,获得了4个三基因聚合且农艺性状优良的株系L17~L20。用不同国家和地区的20个稻瘟病小种、中国流行的7个白叶枯病菌系C1~C7以及安徽省流行的白叶枯病菌系进行大田或/和温室抗病性鉴定,结果显示,株系L17~L20对20个稻瘟病小种均表现出抗性,抗性水平与Pi9(t)基因的供体亲本75-1-127相当,抗谱相同;对白叶枯病的抗性和抗谱与Xa23基因相似,不论在苗期还是在成株期均抗白叶枯病。与Xa21、Xa23基因的供体亲本M12和CBB23相比,成株期的抗性水平有所增强。利用多重PCR技术,在同一PCR反应中可同时选择Pi9(t)和Xa21基因,提高了PCR选择效率。

关键词： 白叶枯病 稻瘟病 Pi9(t)基因 Xa21基因 Xa23基因 分子标记辅助选择 多重PCR

 在线阅读   全文下载 请求原文

实时荧光PCR技术定量检测转Bt基因水稻的研究

张亮; 杨剑波; 宋丰顺; 陈圣; 郭霞; 李莉; 汪秀峰; 《生物学杂志 》 2008 CSCD

摘要：以转Bt基因的"克螟稻"为研究材料,通过使用特异的引物和荧光标记探针,以已知转基因成份含量的水稻样品为模板建立标准曲线,对转基因水稻的NOS和Bt外源基因进行了荧光定量检测分析。初步建立了转基因水稻定量检测的技术方法。

关键词： 实时荧光PCR 转Bt基因水稻 定量检测

 全文链接 请求原文

杂交中籼新组合皖稻185

杨剑波; 李莉; 易成新; 汪秀峰; 赵伟; 陆徐忠; 宋丰顺; 《农村实用技术与信息 》 2007

摘要：皖稻185系安徽省农科院水稻所利用现代分子育种技术与常规育种技术相结合,定向改良协优57(协青早AX057)的父本而选育出的杂交中籼新组合,在2004年品比、2005年中籼验证试验和试种示范中,表现出高产、优质、适应性强等突出特点,适宜于在江淮流域作一季中稻种植。2006年1月通过安徽省审定,审定名称:皖稻185。

 全文链接 请求原文

利用分子标记辅助选择聚合Pi9(t)和Xa23基因

倪大虎; 易成新; 杨剑波; 汪秀峰; 张毅; 章琦; 王春连; 赵开军; 王文相; 李莉; 《分子植物育种 》 2007 CSCD

摘要：利用分子标记辅助选择将广谱高抗稻瘟病的Pi9(t)基因和全生育期高抗白叶枯病的Xa23基因聚合到同一优良株系中,获得了含双基因的优良株系L10～L13。用来自不同地区的20个稻瘟病小种和中国流行的7个白叶枯病小种及安徽白叶枯病小种对聚合株系进行接菌鉴定,结果显示:聚合Pi9(t)和Xa23基因的株系L10～L13同时抗稻瘟病和白叶枯病;与稻瘟病的供体亲本75-1-127相比,抗性水平相当,均达抗级(R)水平,且抗谱相同;与白叶枯病的供体CBB23相比,对白叶枯病的抗性时期一致,均表现为全生育期抗性,而且抗性水平和抗谱相似。通过田间农艺性状的筛选,获得的双基因聚合系具有较好的农艺性状,可直接应用于生产或作为抗性亲本。

关键词： 白叶枯病 稻瘟病 Pi9(t)基因 Xa23基因 分子标记辅助选择

 在线阅读   全文下载 请求原文

水稻单粒种子DNA的快速制备及PCR分析

宋丰顺; 倪大虎; 陆徐忠; 汪秀峰; 张毅; 赵伟; 李莉; 杨剑波; 《安徽农业科学 》 2007 北大核心 CSCD

摘要：以水稻单粒种子为材料,用NaOH溶液抽提DNA,用于PCR分析,结果表明:该方法提取的DNA可以扩增出水稻中的目的基因,并适用于SSR分析。该方法提取DNA速度快,成本低,适合大批量种子DNA的提取。

关键词： 水稻 DNA提取 单粒种子 BT基因 SSR

 全文链接 请求原文

多重PCR分析方法应用于转基因农作物的检测

吴影; 陆徐忠; 赵伟; 汪秀峰; 李莉; 《安徽农业科学 》 2006 北大核心 CSCD

摘要：以转基因大豆、水稻等样品为材料,采用多重PCR技术对转基因作物中常见的启动子、终止子、筛选标记基因和转入的目的基因等多个外源转基因元件进行检测,以期建立一套快速、准确、高效的转基因农作物筛查鉴定技术。通过多重扩增实验,建立了关于转基因大豆检测的大豆内源Lectin基因,花椰菜花叶病毒(Cauliflower mosaic virus,CaMV)35S启动子和根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因NOS终止子的三重PCR分析体系,及关于转基因水稻检测的CaMV35S、NPTII和HPT基因的三重PCR分析的技术体系。并以大豆、水稻等农作物样品为检测材料,采用单一PCR和多重PCR技术同时进行检测,结果表明多重PCR方法具有快速、高效、简便、准确等特点,在转基因成分的检测上具有非常重要的实际应用价值和潜力。

关键词： 转基因成分 多重PCR 检测 技术体系

 全文链接 请求原文

分子标记辅助选择降低籼稻057的直链淀粉含量

张士陆; 倪大虎; 易成新; 李莉; 汪秀峰; 王宗阳; 杨剑波; 《中国水稻科学 》 2005 北大核心 CSCD

摘要：以4种低直链淀粉含量(AC)的籼稻品种(R367、91499、盐恢559、恢527)作优质基因的供体,以产量配合力较强的三系籼稻恢复系057为受体轮回亲本,对高AC值的057进行回交改良。在回交改良中利用分子标记对控制AC值的基因型进行选择,并对分子标记鉴定的Wx基因3种表达类型(GG、TT、GT)植株稻米的AC值进行测定分析。结果显示,GG型植株的稻米AC值高于20%;GT型的变化较大,为17.71%~28.48%;TT型的小于18%。经最小显著差数法(LSR)检验,3种基因型间AC差异达极显著水平。表明这种分子标记对稻米AC值的辅助选择是可靠有效的。通过分子标记辅助选择有效降低了057的AC值。

关键词： 分子标记辅助选择 籼稻 直链淀粉含量 育种 稻米品质

 全文链接 请求原文