科研产出
水禽细小病毒LAMP及其可视化通用检测方法的建立
《中国兽医杂志 》 2025 北大核心
摘要：为了建立鹅细小病毒（GPV）和番鸭细小病毒（MDPV）通用的检测方法，本试验以GPV和MDPV两种水禽细小病毒的NS基因保守序列作为靶标，设计了1组特异性引物，优化建立了水禽细小病毒的环介导等温扩增（LAMP）和LAMP-羟基萘酚蓝（HNB）可视化通用检测方法，并对2种方法的特异性和灵敏性进行检测。采用常规PCR、LAMP和LAMP-HNB对10份水禽临床样品进行检测，以评估2种方法的实用性。结果显示，LAMP方法的最佳反应温度为65℃、反应时间为60 min。2种方法仅能扩增GPV和MDPV，而对其他5种常见水禽病毒的检测结果均为阴性，最低检出浓度均为1×10-5 ng/μL。2种方法与常规PCR的检测结果一致，符合率达100%。结果表明，建立的LAMP方法和LAMP-HNB可视化方法具有灵敏性好、特异性高、仪器要求低和可视化等优点，可为水禽细小病毒的现场快速检测提供技术支撑。
关键词： 鹅细小病毒(GPV) 番鸭细小病毒(MDPV) NS基因 环介导等温扩增(LAMP) 可视化
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番鸭细小病毒NS和VP基因的克隆及序列分析
《中国兽医杂志 》 2022 北大核心
摘要：为进一步了解番鸭细小病毒(MDPV)基因的遗传变异特征,本试验采用分段PCR扩增法获得了2个MDPV安徽分离株(AH1901和AH1902)基因组NS和VP全长基因,并与GenBank数据库中的20个水禽细小病毒基因组序列进行了比对.序列分析显示,克隆的MDPV基因均包括完整的NS和VP基因,分别为1 884 bp和2 199 bp,VP基因核苷酸序列变异程度相对较高,而NS基因则较为保守;进化分析显示,安徽分离株AH1901和AH1902位于同一分支,二者与国内分离的MDPV毒株ZJ-JH-2013基因遗传距离最近,可能来源于同一毒株,与MDPV疫苗株P1及国外分离毒株FM基因遗传距离则较远;安徽分离株AH1901和AH1902的NS基因序列同源性为99.8%,VP基因序列一致.两者的NS、VP基因序列与分离株ZJ-JH-2013的同源性最高,与重组型毒株SAAS-SHNH及安徽分离株AH 1401同源性也在99.5%以上;与疫苗株P1、国外分离株FM同源性则较低,其中VP基因仅为88.9%、89.3%.本试验结果表明近年国内的MDPV分离株同源性均较高,但仍存在一定程度的基因变异,增加了诊断与防控该病的难度.
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