转基因大豆CAL16转化体特异性定量检测方法的建立

王沛然; 陆佳雨; 许学; 吴爽; 李晨; 胡笑林; 潘伟芹; 汪秀峰; 《中国油料作物学报 》 2025 北大核心 CSCD

摘要：以杭州瑞丰生物科技有限公司研发的转Cry1Ab/Vip3Da基因抗虫大豆，即转基因大豆CAL16为材料，建立CAL16转化体特异性定量PCR检测方法，旨在给我国CAL16及其衍生品系的生物育种产业化提供技术支撑。根据5′端和3′端旁侧序列设计引物探针组合，筛选出5′端一对最佳引物组合，PCR产物片段大小为112 bp。经特异性测试、标准曲线的建立、正确度和精密度测试、检出限和定量限测试、稳健性测试、微滴式数字PCR验证，该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。检出限达到0.025%，相当于10个拷贝的CAL16特异性片段；定量限达到0.1%，约为40个拷贝。实验室间循环验证显示：该方法符合国家标准方法各项要求，可满足检测需求。最终对CAL16定量方法进行不确定度评定，确保量值科学可靠，满足定量标识的需求。

关键词： 转基因大豆 CAL16 转化体特异性 定量检测 不确定度