低能离子束介导外源基因进入水稻细胞的研究

杨剑波; 吴跃进; 吴李君; 吴家道; 余增亮; 《安徽农业大学学报 》 1994

摘要：用离子束介导法将编码β－葡萄糖苷酸酶的ｇｕｅ基因引入受体植物细胞，并实现瞬间表达。水稻悬浮细胞经离子束辐照后，电镜下能观察到细胞表面留下的溅射和刻蚀痕迹，细胞存活率随辐照剂量的增加而显著降低。将离子束（３０ｋｅＶ，２×ｌ０１５Ｎ＋／ｃｍ２）处理后的水稻悬浮细胞，浸入含有ｇｕｓ基因外源ＤＮＡ的ＳＳＣ温育介质，两天后，观察到受离子束直接作用的细胞团的一面有外源ｇｕｓ基因的导入和表达。ｇｕｓ基因瞬间表达的最佳处理剂量悬浮细胞为２×ｌ０１５Ｎ＋／ｃｍ２，成熟胚为２０×ｌ０１５Ｎ＋／ｃｍ２，而且３０ｋｅＶ能量的离子束处理明显较２０ｋｅＶ优越。ＳＳＣ缓冲导入介质最为理想，而添加ＤＭＳＯ（一种细胞促渗透剂）的ＳＳＣ和富含ｃａ２＋的ｋｒｅｎ’ｓＦ溶液（ｃａ２＋对促进质膜稳定性有好处）对离子束介导外源基因进入水稻细胞均不理想。

关键词： 离子束，转化，外源基因，水稻细胞