J亚群禽白血病SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

王莉; 黄安宁; 李槿年; 张丹俊; 刘雪兰; 《中国预防兽医学报 》 2013 北大核心 CSCD

摘要：为建立一种能够快速、灵敏和特异地检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,本研究以ALV-J原型病毒株HPRS-103的pol基因3'端与gp85编码基因之间的保守区域(5 258 bp～5 802 bp)为检测目的片段,构建重组质粒并作为靶基因,通过对其浓度、引物浓度和退火温度的优化,建立了ALV-J SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。结果显示该方法的最低检测限度为2.36×102拷贝/μL,比普通PCR高100倍;与其他禽源病毒无交叉反应;批内和批间变异系数均小于5%。表明本研究建立的方法具有良好的特异性、稳定性和灵敏性。采用该方法对100只临床病鸡进行检测,ALV的检出率为44%。随机选择10只感染阳性鸡,检测病毒基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏中的分布与表达水平,结果表明ALV-J在各主要脏器中均有分布,但以肾脏中的病毒表达量最高。

关键词： J亚群禽白血病病毒 SYBR GreenⅠ 荧光定量PCR 病毒基因表达水平