猪流行性腹泻病毒N蛋白纳米抗体的筛选与鉴定

殷冬冬; 丁祥; 兰梦蝶; 姬凯元; 王洁茹; 尹磊; 沈学怀; 戴银; 赵瑞宏; 候宏艳; 胡晓苗; 潘孝成; 《华北农学报 》 2024 北大核心 CSCD

摘要：由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的高度接触性胃肠道传染病对我国养猪业造成巨大的经济损失。为建立PEDV抗体检测方法及N蛋白的功能研究奠定基础，通过噬菌体展示技术针对PEDV N蛋白进行筛选获得其特异性的纳米抗体（Nb）。利用前期制备的N蛋白免疫羊驼，采集其外周血并分离淋巴细胞，提取细胞总RNA,反转录为cDNA,通过PCR扩增重链抗体重链可变区（VHH）,插入pCANTAB5E-ccdb载体，电转化至ER2738感受态细胞，构建VHH噬菌体展示文库；随后，以PEDV N蛋白作为靶向蛋白，对文库进行4轮淘选获得阳性噬菌体，将其克隆至pET-30a载体，表达纯化后通过间接ELISA、Western Blot鉴定Nb的结合力和特异性。结果显示，羊驼经5次免疫后，抗体效价达到1∶25 600。构建的噬菌体展示文库库容为4.72×10～8,丰度为4.3×10¹⁰ cfu/mL,阳性率为93.75%。经过4轮筛选，获得16株氨基酸序列不同的Nb,随后验证了Nb45与PEDV N蛋白具有良好特异性和结合能力。研究筛选获得了PEDV N蛋白特异性Nb,为PEDV检测方法的建立和基础研究提供生物材料。

关键词： 猪流行性腹泻病毒 N蛋白 噬菌体展示 纳米抗体 特性鉴定