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猪流行性腹泻病毒N蛋白纳米抗体的筛选与鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 殷冬冬 1 ; 丁祥 2 ; 兰梦蝶 3 ; 姬凯元 2 ; 王洁茹 1 ; 尹磊 1 ; 沈学怀 1 ; 戴银 1 ; 赵瑞宏 1 ; 候宏艳 1 ; 胡晓苗 1 ; 潘孝成 1 ;

作者机构： 1.安徽省农业科学院畜牧兽医研究所

2.安徽农业大学动物科技学院

3.宁国市动物卫生监督所

关键词： 猪流行性腹泻病毒;N蛋白;噬菌体展示;纳米抗体;特性鉴定

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2024 年 39 卷 006 期

页码： 224-230

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的高度接触性胃肠道传染病对我国养猪业造成巨大的经济损失。为建立PEDV抗体检测方法及N蛋白的功能研究奠定基础，通过噬菌体展示技术针对PEDV N蛋白进行筛选获得其特异性的纳米抗体（Nb）。利用前期制备的N蛋白免疫羊驼，采集其外周血并分离淋巴细胞，提取细胞总RNA,反转录为cDNA,通过PCR扩增重链抗体重链可变区（VHH）,插入pCANTAB5E-ccdb载体，电转化至ER2738感受态细胞，构建VHH噬菌体展示文库；随后，以PEDV N蛋白作为靶向蛋白，对文库进行4轮淘选获得阳性噬菌体，将其克隆至pET-30a载体，表达纯化后通过间接ELISA、Western Blot鉴定Nb的结合力和特异性。结果显示，羊驼经5次免疫后，抗体效价达到1∶25 600。构建的噬菌体展示文库库容为4.72×10～8,丰度为4.3×1010 cfu/mL,阳性率为93.75%。经过4轮筛选，获得16株氨基酸序列不同的Nb,随后验证了Nb45与PEDV N蛋白具有良好特异性和结合能力。研究筛选获得了PEDV N蛋白特异性Nb,为PEDV检测方法的建立和基础研究提供生物材料。

  • 相关文献

[1]猪流行性腹泻病毒安徽分离株N基因的克隆与表达. 潘孝成,沈学怀,赵瑞宏,戴银,胡晓苗,侯宏艳,周学利,张丹俊. 2019

[2]猪流行性腹泻病毒SD株的分离与鉴定. 潘孝成,赵瑞宏,沈学怀,钱坤,胡晓苗,周学利,戴银,侯宏艳,张丹俊. 2015

[3]猪流行性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用. 沈学怀,潘孝成,巩雅静,张丹俊,赵瑞宏,胡小苗,戴银,侯红艳,周学利,朱传民. 2014

[4]6株猪流行性腹泻病毒N基因的克隆与分析. 潘孝成,沈学怀,赵瑞宏,戴银,胡晓苗,侯宏艳,周学利,张丹俊. 2019

[5]猪流行性腹泻病毒检测技术研究进展. 芮聪杰,潘孝成,沈学怀,赵瑞宏,张丹俊. 2018

[6]猪流行性腹泻病毒检测技术研究进展. 芮聪杰,潘孝成,沈学怀,赵瑞宏,张丹俊. 2018

[7]猪流行性腹泻病毒IgG抗体间接ELISA检测方法的建立. 芮聪杰,潘孝成,沈学怀,赵瑞宏,尹磊,戴银,胡晓苗,侯宏艳,周学利,张丹俊. 2020

[8]猪流行性腹泻病毒卵黄抗体的制备与应用. 潘孝成,赵瑞宏,沈学怀,张丹俊,胡晓苗,周学利,戴银,侯宏艳,钱坤. 2016

[9]猪流行性腹泻病毒RAA-CRISPR/Cas13a检测方法的建立与初步应用. 刘华,殷冬冬,邵颖,宋祥军,王振宇,潘孝成,涂健,何长生,朱良强,祁克宗. 2023

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