烟草青枯病拮抗菌的筛选及发酵条件试验

许大凤; 倪海军; 季学军; 李田; 高正良; 王芳; 周本国; 《烟草科技 》 2016 北大核心 CSCD

摘要：为了筛选对烟草青枯病有拮抗作用的生防菌株,有效防治该病害,从青枯病发病较重田块的健康烟草根系周围土壤中取样,采用点接法筛选出6株对烟草青枯病有较强拮抗作用的菌株,其抑菌圈直径均>8 mm,其中菌株XC4抑菌活性较强且拮抗效果稳定。通过单因素试验进行了发酵条件的初步研究,结果表明,当发酵时间48 h,发酵温度30℃,p H值7,接种量2%,转速190 r/min,碳源为牛肉膏,氮源为胰蛋白胨时,菌株XC4发酵效果最好。发酵条件经初步优化,菌株XC4对青枯病菌的拮抗效果由原来的抑菌圈直径12.5 mm增至21.5 mm,比优化前提高了72%。

关键词： 烟草青枯病 拮抗细菌 筛选 发酵条件

利用酵母双杂交筛选与马铃薯Y病毒CKVNP互作的寄主蛋白

王芳; 杨金广; 周本国; 许大凤; 王凤龙; 高正良; 《植物病理学报 》 2015 北大核心 CSCD

摘要：马铃薯Y病毒坏死株系(Potato virus Y necrosis strain,PVY~N)侵染烟草后烟草表现叶脉坏死症状,但其致病的分子机制,特别是与病毒互作的宿主蛋白研究鲜有报道。PVY~N(JQ971975)的CKVNP编码区(CI-6K2-VPg-NIa-Pro区域,核苷酸5 540-6 491)与烟草表现叶脉坏死症状相关,研究其与寄主间的分子互作有助于揭示病毒侵染致烟草表现叶脉坏死症状的分子机制。本文将PVY~N的CKVNY编码区定向克隆到含有DNA结合功能域(DNA-binding Domain,BD)载体上,构建与激活功能域(Activation Domain,AD)融合表达的烟草cDNA文库,用CKVNP为诱饵筛选文库寻找与其互作的寄主因子。结果表明:诱饵质粒插入的CKVNP编码区可读框和氨基酸序列均正确,对酵母菌株无自主激活能力;烟草cDNA文库容量为7.0×10~6 CFU/mL,且插入片段平均大小在1.0 kb以上,质量符合筛选要求;经过筛选和共转化回转验证,有94个候选基因与CKVNP在酵母中互作。挑选22个酵母质粒进行测序得到这些基因的cDNA序列,BLAST分析结果表明,这些基因共编码14种蛋白。

关键词： 马铃薯Y病毒 酵母双杂交 叶脉坏死症状

四川凉山地区烟草黑胫病菌的ITS序列分析

张海珊; 许大凤; 刘东阳; 周本国; 高正良; 卢军; 章东方; 严丹侃; 王芳; 王勇; 《中国烟草科学 》 2015 CSCD

摘要：本研究利用真菌核糖体基因转录间隔区(ITS)通用引物,PCR扩增四川省凉山州不同地区的20株烟草黑胫病菌的ITS序列,并对PCR产物进行了克隆测序。结果表明,20个供试菌株的ITS1-5.8S-ITS2总长均为803 bp;各菌株之间的ITS序列同源性达到99.3%以上;与Gen Bank报道的寄生疫霉台湾烟草分离株Phytophthora parasitica(GU111675.1)的同源性在99.6%~100%之间;但各菌株ITS序列的个别位点存在突变,这些突变主要集中在ITS2区上,其中第468处的突变具有一定地域性,主要为德昌和西昌的菌株。利用MEGA6软件对20个供试菌株及Gen Bank中登陆的15个疫霉属菌株序列进行聚类分析,供试菌株与Gen Bank上登录的GU111675.1、KF010303.1、AJ854295.1、KC768775.1、L41383聚在同一聚类组上,均为Phytophthora parasitica(或Phytophthora nicotianae),其它疫霉种聚在不同的聚类组上,遗传关系较远,这表明来自四川凉山不同地区的20株烟草黑胫病分离菌株均为寄生疫霉(Phytophthora parasitica)。

关键词： 烟草黑胫病 ITS 寄生疫霉 烟草

四种杀菌剂对烟草青枯病菌的毒力比较

黄保宏; 高正良; 周本国; 陈方旭; 许大凤; 王芳; 《中国烟草学报 》 2015 北大核心 CSCD

摘要：为筛选对烟草青枯病菌更具抑菌作用的杀菌剂,采用"改良抑菌圈法"测定了4种杀菌剂对烟草青枯病菌的毒力。结果表明:4种杀菌剂抑菌率随浓度提高,青枯灵、农用硫酸链霉素和克菌康在1450.0、310.0和700.0 mg·L-1浓度下,72 h时抑菌率分别达到94.3%、89.1%和84.4%,辛菌胺醋酸盐的抑菌率在48 h时达到最高78.1%。4种药剂对烟草青枯病菌的毒力大小依次为农用硫酸链霉素>辛菌胺醋酸盐>青枯灵>克菌康,前两者EC50分别为274.57 mg·L-1和148.25 mg·L-1。表明辛菌胺醋酸盐和农用硫酸链霉素是防控烟草青枯病较为理想的杀菌剂。

关键词： 改良抑菌圈法 杀菌剂 烟草青枯病菌 毒力测定

利用siRNA高通量测序技术检测烟草病毒

王芳; 周本国; 许大凤; 高正良; 《植物病理学报 》 2015 北大核心 CSCD

摘要：烟草是我国的主要经济作物之一,病毒病是烟草生产上的重要病害。常见的烟草病毒主要有马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、烟草脉带花叶病毒(Tobacco vein banding mosaic virus,TVMBV)等[1]。此外,近年来在烟草上还发生一些新的病毒病害,如南美红辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)[2]、番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,ZTSV)[3]和番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)[4]。这些病毒

烟草PVY~N辽宁分离物全序列测定与分析

王芳; 高正良; 周本国; 许大凤; 安梦楠; 吴元华; 《中国烟草学报 》 2013 CSCD

摘要：利用引起烟草脉坏死病的马铃薯Y病毒脉坏死株系辽宁分离物(Potato virus Y—vein necrosis strain Liaoning isolate,PVYN-LN),以GenBank中已有的PVY全序列为基础,设计特异引物。通过总RNA提取、RT-PCR、3’RACE和5’RACE扩增及序列测定,测得PVYN-LN全长基因组序列(NCBI登录号为JQ971975)包括9714个碱基(含PolyA尾),整条序列仅包含一个由9186个碱基组成的开放读码框(ORF),编码一条包含3061个氨基酸的多聚蛋白。对所得序列进行BLAST,利用MEGA软件对所测得的PVYN-LN全序列与GenBank中已有的PVY全序列及氨基酸进行系统进化分析,发现PVYN-LN分离物与已报道的PVYN株系具有较高的进化亲缘关系,该分离物属于PVYN株系。序列重组分析软件RDP4分析,该序列无重组。

关键词： 烟草 PVYN-LN 基因组全序列 重组分析

利用Real-time RT-PCR法检测抗病毒活性物质对CMV复制的影响

王芳; 高正良; 周本国; 雷艳丽; 许大凤; 李英; 《烟草科技 》 2011 北大核心

摘要：为准确检测经活性物质处理后的烟草体内病毒含量,建立了real-time RT-PCR检测体系。从烟田中分离到1株对CMV有拮抗作用的细菌B6,经分离纯化得到拮抗CMV的活性物质B6p,其分子量为40.6 kDa。利用叶圆片法,分析了活性物质处理后寄主体内病毒的复制特点,结果表明寄主体内的病毒复制作用受到了拮抗活性物质的抑制,并且随着拮抗活性物质浓度的增加病毒的复制作用减弱。

关键词： real-time RT-PCR 病毒 活性物质 CMV