猪流行性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

沈学怀; 潘孝成; 巩雅静; 张丹俊; 赵瑞宏; 胡小苗; 戴银; 侯红艳; 周学利; 朱传民; 《养猪 》 2014

摘要：根据Gen Bank登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)毒株(登录号KJ960180)的M基因保守序列,设计1对扩增片段大小为299 bp的特异性引物,经PCR扩增、克隆、测序鉴定后,提取质粒作为阳性标准品,建立了PEDV的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法。该方法在1.21×103~1.21×108拷贝/μL范围内呈现良好的线性,相关系数(R2)为0.999,扩增效率为99%,扩增产物的熔解曲线为单个特异峰,产物Tm值为85.5~86℃,最低检测限为1.21×101拷贝/μL。本研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、重复性好、成本低且操作简单,适用于PEDV的早期诊断、定量研究和流行病学监测。

关键词： 猪流行性腹泻病毒 SYBR GreenⅠ 荧光定量RT-PCR

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