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水稻高盐胁迫下的酵母双杂交文库构建及OsRPK1胞内互作蛋白质的筛选

文献类型： 中文期刊

作者： 邹禹 1 ; 刘园园 2 ; 钱宝云 1 ; 占新春 1 ; 郑乐娅 1 ; 张炜 2 ; 张培江 1 ;

作者机构： 1.安徽省农业科学院水稻研究所

2.南京农业大学生命科学学院

关键词： 水稻;OsRPK1;高盐胁迫;酵母双杂交cDNA文库

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2019 年 35 卷 004 期

页码： 753-763

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了挖掘水稻OsRPK1胞内互作蛋白质,阐明OsRPK1参与高盐胁迫的分子机制,本研究利用SMART技术,构建水稻高盐胁迫下根尖的酵母双杂交文库.PCR扩增获得OsRPK1基因编码胞内区域的碱基序列,构建诱饵表达载体(pGBKT7-OsRPK1-CD),检测诱饵表达载体在酵母中的毒性和自激活活性,筛选OsRPK1胞内互作蛋白,进一步分析高盐胁迫下候选基因的表达模式.结果表明,构建的cDNA文库库容量为1.11×107 CFU,文库重组率为96%,文库插入片段多态性较好.成功构建了诱饵表达载体(pGBKT7-OsRPK1-CD),经检测诱饵表达载体无毒性,无自激活活性.诱饵表达载体与cDNA文库进行双杂交筛选,经测序和比对分析获得了11个重要的候选基因,检测候选基因在高盐处理下的表达情况,其中8个候选基因受高盐诱导表达,2个候选基因受高盐胁迫抑制表达,1个候选基因受高盐胁迫瞬时诱导表达后表达量又受到显著抑制.

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