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嗜水气单胞菌菌落多重PCR方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

作者： 张静 1 ; 王永杰 1 ; 陈红莲 1 ; 鲍俊杰 1 ; 孙雯 1 ;

作者机构： 1.安徽省农业科学院水产研究所

关键词： 多重PCR;嗜水气单胞菌;菌落PCR;毒力基因

期刊名称： 微生物学通报

ISSN： 0253-2654

年卷期： 2022 年 49 卷 002 期

页码： 841-850

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [背景]嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)对水产动物、畜禽和人类均有致病性.基因表达的溶血素、气溶素和肠毒素是重要毒力因子,在致病性嗜水气单胞菌早期检测及防治中尤为重要.目前采用菌落直接提取DNA用于多重PCR研究的相关报道较少.[目的]基于菌落PCR方法建立针对嗜水气单胞菌溶血性基因、肠毒素基因和16S rRNA基因特异性片段(5个基因片段)的多重PCR快速检测方法.[方法]采用选择性RS (Rimler-Shotts)培养基对样品中嗜水气单胞菌有效富集分离和辨认,建立并优化嗜水气单胞菌16S rRNA、ast、alt、 aerA、act这5个基因的多重PCR方法,比较菌落PCR中DNA模板不同提取方法对多重PCR扩增结果的影响,并检测该方法对维氏气单胞菌、温和气单胞菌、杀鲑气单胞菌的特异性.[结果]通过对RS培养基上单菌落的16S rRNA基因鉴定,初步判定嗜水气单胞菌和其他可培养菌的菌落形态,对其富集程度进行可视化辨别.多重PCR反应体系优化结果显示,引物浓度最优配比为16S rRNA∶ast∶alt∶aerA∶act=1∶2∶2∶3∶4.菌落PCR结果显示,新鲜菌液采用煮沸冷冻离心法和煮沸离心法均能扩增出清晰条带,采用单菌落处理则需煮沸冷冻离心法.该多重PCR方法具有特异性.[结论]利用菌落多重PCR可以不通过试剂盒抽提获得DNA模板,简便、直观地检测嗜水气单胞菌及其毒力基因,具有特异性.

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