科研产出
酸枣愈伤组织转化体系构建及在ZjBRC1调控ZjYUCCA表达中的应用
《园艺学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：以来源于同一株酸枣实生苗的茎段、叶片、子叶和胚轴等组织为外植体试材,筛选到适合子叶、胚轴和叶片诱导愈伤组织的培养基为MS+1.0 mg·L-12,4-D+0.4 mg.L-1 TDZ;利用农杆菌介导法,当浸染液浓度OD600为0.6~0.8、浸染时间为30 min时,酸枣叶片、子叶、胚轴和茎段愈伤组织遗传转化率分别为31.8%、25.6%、24.5%和23.8%.利用叶片诱导的愈伤组织转化体系,获得了调控分枝发育关键因子ZjBRC1融合表达嵌合抑制子SRDX和35S∶∶GFP空载体对照的转基因愈伤组织.荧光定量qRT-PCR分析显示,与35S∶∶GFP转基因愈伤组织相比,ZjBRC1-SRDX下调生长素合成基因ZjYUCCA7/10-3/10-4的表达,而上调ZjYUCCA2/4/6表达.综上,本研究中建立和优化了枣愈伤组织诱导和转化体系.
全文链接
请求原文
三个方便实用的植物表达载体构建与验证
《植物遗传资源学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为满足植物功能基因组学研究及转基因安全性需要,本研究根据一些国内外引进或商业化的植物表达载体及其相关元件,构建了3个适合于植物,尤其是单子叶植物转化的表达载体,即p AH006、p WMB022和p WMB025。p AH006载体包含由玉米泛素ubi启动子调控的GUS基因和bar基因的完整T-DNA区域,此区段能够被酶切回收,可用于单子叶植物农杆菌介导转化效率评价及基因枪介导线状DNA转化效果研究;p WMB022载体携带由双35S启动子调控的玉米色素基因Lc和C1,可用作基因枪介导的共转化筛选标记,直观筛选含目标基因转基因材料;p WMB025载体携带由ubi启动子调控的、商业化转基因植物中广泛利用的EPSPS基因,可用于禾谷类作物农杆菌或基因枪介导的遗传转化,载体多克隆位点可通过酶切方式更换目标基因。酶切鉴定结合农杆菌或基因枪介导的小麦幼胚愈伤组织或叶片转化验证此3个载体表明,载体构建正确,其标记基因、可视化基因和报告基因均能正常表达。这3个载体的构建对于小麦等植物转化效率提升、安全型转基因作物获得和植物功能基因组学研究等具有重要意义。
P_(SAG12)-ipt嵌合基因转化马铃薯体系的研究
《西北植物学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：以根癌农杆菌介导法将PSAG12-ipt嵌合基因导入马铃薯栽培品种,对影响马铃薯遗传转化的多种因素进行系统研究.结果表明:马铃薯茎段分化效率高于叶片,马铃薯愈伤诱导和芽分化最适培养基为MS+6-BA 0.25mg/L+NAA 0.25mg/L+2,4-D 0.25mg/L,添加1%Na2SO3能有效防止褐化;茎段愈伤诱导和分化苗生根最适的Kan浓度分别为50mg/L和75mg/L;外植体预培养2d,OD600为0.2～0.5的农杆菌浓度侵染8min、共培养3d后进行选择培养能有效地提高植株再生能力.用PSAG12和ipt双重PCR检测再生植株,阳性转化率为65.8%.Southern blotting结果表明,转基因植株多以单拷贝形式整合进马铃薯基因组中.
关键词： PSAG12-ipt 遗传转化 马铃薯 细胞分裂素(CTK) 根癌农杆菌
全文链接
请求原文
哺乳动物N-糖基化途径中关键酶唾液酸合酶和CMP-唾液酸合成酶基因在转基因家蚕中的表达
《昆虫学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：对昆虫的N-糖基化途径进行修饰改变是扩展昆虫蛋白表达系统应用范围的重要途径。本研究利用基于piggyBac转座子的家蚕Bombyx mori转基因技术表达昆虫所缺乏的哺乳类糖基化途径中的关键基因,构建了可以同时表达小鼠Mus musculus唾液酸合酶和小鼠CMP-唾液酸合成酶两个基因的piggyBac表达载体,选用家蚕肌动蛋白A3启动子控制基因的表达,并导入3×P3启动子控制下的增强绿色荧光蛋白EGFP作为分子标记。在得到的G1代转基因家蚕中对转入的基因进行了分子水平的鉴定和分析,为在家蚕这种模式昆虫中模拟哺乳类糖基化途径奠定了基础。
关键词： 糖蛋白 N-糖基化途径 家蚕 转基因 唾液酸合酶 CMP-唾液酸合成酶
全文链接
请求原文
根癌农杆菌介导的水稻转基因技术体系的优化
《生物学杂志 》 2011 CSCD
摘要：对根癌农杆菌介导水稻遗传转化的各重要因素逐一分析,比较不同基因型、培养基成份、光照、继代次数、菌液浓度、侵染时间、干燥情况等因素对遗传转化的影响。通过培养条件的优化,建立了一个高效的水稻转化技术体系。研究结果表明,相比较于暗培养,光照培养进行愈伤诱导可以使诱导天数缩短4~5d;诱导培养基中加入适量的激素可以使籼稻愈伤诱导提高25%~30%;分化培养基中加入适量的氨基酸和甘露醇可以使植株再生频率提高15%~20%。
全文链接
请求原文
利用Cre/loxP系统删除转Bt基因水稻中的选择标记基因
《生物学杂志 》 2011 CSCD
摘要：来源于噬菌体P1的Cre/loxP位点特异性重组系统是目前在植物遗传转化中应用较多,较成熟的一个标记基因删除系统。在这个系统中,Cre酶可以特异性的识别和切割位于两个lox位点之间的标记基因,整个系统重组仅需Cre和lox识别位点即可完成而无需其它辅因子的参加。利用农杆菌介导法成功地将cre基因导入供试材料"皖粳97",得到转hpt-cre基因水稻植株;将其与先期转基因育成的携带loxp-hpt-loxp-bt基因的"皖粳97"株系进行田间杂交,通过PCR分析,Cre/loxP重组系统定向删除了潮霉素抗性筛选标记基因。
关键词： 水稻 转基因 Bt Cre/loxP系统
全文链接
请求原文
以pmi为筛选标记的水稻转基因研究
《安徽农业科学 》 2011 北大核心
摘要：[目的]建立一种快速、高效的甘露糖安全筛选体系。[方法]以绿色荧光蛋白(GFP)编码基因为报告基因,用农杆菌介导的方法将磷酸甘露糖异构酶基因(pmi)转入水稻品种皖粳97,并对转化和筛选条件进行优化。[结果]受体品种皖粳97,在32℃光照条件下诱导愈伤的出愈率可达90.3%,且生长较快;培养基中甘露糖筛选压力以5g/L蔗糖+15g/L甘露糖较为适宜,在该条件下筛选21d,进而分化成苗,转化频率可达20.6%。[结论]该研究确立的甘露糖筛选体系,能明显缩短筛选周期、提高转化效率,有利于转基因水稻的安全生产。
关键词： 水稻 转基因 甘露糖 绿色荧光蛋白(GFP)
全文链接
请求原文
