转基因水稻筛查检测阳性质粒pUC18-RICE-screen的构建及分子评价

马卉; 焦小雨; 许学; 李夏莹; 陈子言; 吴爽; 潘伟芹; 张秀杰; 汪秀峰; 《农业生物技术学报 》 2020 北大核心 CSCD

摘要：标准物质是转基因生物安全监管和检验检测工作中进行质量控制的关键.目前,国内用于转基因检测的阳性对照资源匮乏,主要为基体标准物质,难以满足转基因生物安全监管和检测工作的需要.质粒标准物质作为转基因检测标准物质新的发展方向,具有广泛的应用价值.本研究通过收集整理相关数据库信息,获得了国内外19种主要转基因水稻(Oryza sativa)品系的遗传信息,全面分析其外源基因表达框中调控元件/基因的组成情况及使用频率,并结合目前现有转基因检测技术标准,确定了以水稻内标基因磷脂酶D基因(phospholipase D gene,PLD)、蔗糖磷酸合酶基因(sucrose phosphate synthase gene,SPS)和靶标基因CaMV35S启动子(35S promoter from Cauliflower mosaicvirus,PCaMV35S)、Ubiquitin启动子(ubiquitin promoter from maize,PUbiquitin)、CaMV35S终止子、NOS终止子(terminator of nopaline synthase gene,TNOS)、抗草丁膦除草剂基因(bialaphos resistance gene,Bar)、潮霉素磷酸转移酶基因(hygromycin phosphotransferase gene,HPT)、苏云金芽胞杆菌基因(Bacillus thuringiensis gene,Bt)等9个调控元件/基因用于构建阳性质粒pUC18-RICE-screen.该质粒通过人工合成技术获得,经酶切、测序、PCR验证,以及对检测不同筛查元件/基因的适宜质粒浓度进行综合评价,结果表明,该质粒可用于本研究所涉19个转基因水稻的筛查检测,且其作为阳性对照用于各筛查元件/基因PCR和qRT-PCR筛查检测的适宜浓度范围为1×103~1×105 copies/μL.本研究为转基因水稻安全监管提供了一种不依赖于转基因水稻原材料的阳性对照,也为解决转基因水稻阳性标准品匮乏问题供了技术支持.

关键词： 转基因水稻 阳性质粒分子 调控元件 筛查检测