科研产出
翘嘴鳜学习记忆相关基因c-fos对食欲基因的调控
《中国水产科学 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：学习记忆在动物获得新的觅食技巧和食物偏好方面扮演着重要的角色。为评估学习记忆对翘嘴鳜（Siniperca chuatsi）摄食调控的影响,构建翘嘴鳜学习记忆相关基因c-fos及zif268荧光过表达载体,并以pcDNA3.1-EGFP载体质粒中的绿色荧光蛋白基因为报道基因进行电转实验,优化电压、脉冲时间、质粒浓度和电击次数等电转条件,确立最佳条件。利用电击的方式转染翘嘴鳜脑细胞,检测食欲基因mch、agrp、pomc、npy表达变化。结果显示,成功构建了学习记忆过表达载体pcDNA3.1-c-fos-EGFP、pcDNA3.1-zif268-EGFP。翘嘴鳜脑细胞电转染的最适条件:细胞密度1×106/mL、电压240 V、脉冲时间5 ms、质粒6μg、电击1次、转染48 h,可见大部分荧光蛋白表达,转染率较高,表明pc DNA3.1-EGFP在体外成功转染翘嘴鳜脑细胞。过表达c-fos基因后,食欲相关基因pomc和npy m RNA水平均显著上升。而过表达zif268基因后,并未发现食欲基因有差异表达。以上结果说明,翘嘴鳜学习记忆相关基因c-fos的表达影响了食欲相关基因pomc和npy的表达。
关键词： 翘嘴鳜 过表达 电转染 c-fos pomc npy
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一个抗旱/抗寒基因过表达载体构建及转基因植株的筛选鉴定
《安徽农业科学 》 2015
摘要：[目的]进一步研究LWT1基因在调控低温和干旱应答中的功能,构建拟南芥LWT1基因过表达载体,获得相应的转基因株系。[方法]以野生型拟南芥的c DNA为模板,利用PCR扩增LWT1基因全长,将该基因连接到p ART27载体上。将获得的重组载体转化至农杆菌菌株GV3101,通过浸花转化法将LWT1重组载体转化到拟南芥野生型植株中,利用转基因筛选与遗传鉴定获得LWT1转基因阳性植株。[结果]LWT1基因CDS全长990 bp,PCR电泳结果一致,测序比对结果正确。通过抗性筛选和分子鉴定获得转基因植株。[结论]LWT1过表达载体构建成功并获得相应的转基因株系,为进一步研究该基因的分子机制奠定基础。
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