安徽地区新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及其σC基因序列分析

胡晓苗; 李薇; 李婷; 许夏澎; 薄宗义; 郭梦娇; 张小荣; 吴艳涛; 戴银; 张成成; 《中国预防兽医学报 》 2024 北大核心 CSCD

摘要：为掌握新型鸭呼肠孤病毒（NDRV）的最新流行特征，本研究收集安徽某地区鸭场出现肝组织肿胀、出血等临床症状的25份雏鸭肝脏及脾脏样品，利用RT-PCR方法检测NDRV。将RT-PCR检测为阳性的病料样品接种SPF鸡胚分离病毒，收获第3代尿囊液进行PCR检测及病毒纯净性鉴定；同时对NDRV分离株的全长σC基因进行克隆并测序，将测序所得的分离株σC基因序列与GenBank中登录的21株禽源呼肠孤病毒参考株的相应基因序列及推导氨基酸序列进行相似性比对分析，利用Mega 7.0软件构建分离株基于σC基因的系统进化树，并进行σC基因编码氨基酸序列的突变分析。将分离株接种Vero细胞观察其体外培养特性，感染雏鸭进行致病性试验。结果显示，25份病料样品中检出3份NDRV阳性样品，将阳性病料样品接种鸡胚3 d内，鸡胚全部死亡，并伴有水肿、严重充血等现象；病毒纯净性试验结果显示，病料样品仅NDRV呈阳性，其他病原如鸭甲型肝炎病毒（DHV）、鸭坦布苏病毒（DTMUV）、禽呼肠孤病毒（ARV）、番鸭呼肠孤病毒（MDRV）、H9亚型禽流感病毒（H9N2 AIV）及禽腺病毒（FAdV）均为阴性。将3株分离株经测序分析，结果显示，其目的基因序列完全一致，为同一株病毒，并将其命名为NDRV AH株。对NDRV AH株σC基因进行序列相似性分析发现，NDRV AH株与其他NDRV参考株σC核苷酸序列的相似性为89.5%～99.0%，氨基酸序列的相似性为85.3%～98.9%。σC基因的遗传演化结果显示，NDRV AH株属于基因2型。σC氨基酸比对分析结果显示，与灭活疫苗TH11株（KC493571.1）相比，NDRV AH株aa67、aa93、aa100、aa132、aa151、aa158、aa212、aa253和aa298均发生了突变。将该分离株接种Vero细胞，可观察到细胞出现形态圆缩、细胞核聚集等细胞病变。致病性试验结果显示，感染雏鸭死亡率为40%，剖检发现雏鸭肾脏、肝脏出血，脾脏肿大，有轻微坏死灶或大面积坏死灶，有些脾脏质地较硬。可见大面积坏死灶。本研究揭示了NDRV在我国安徽地区的分子流行病学特征，为变异株疫苗研发奠定了基础，对NDRV感染的防治具有重要意义。

关键词： 新型鸭呼肠孤病毒 分离鉴定 σC基因 进化分析 致病性试验