鹅源巴氏杆菌的分离与鉴定

胡晓苗; 张丹俊; 戴银; 赵瑞宏; 潘孝成; 周学利; 侯宏艳; 沈学怀; 朱传明; 《安徽农业科学 》 2018

摘要：[目的]鉴定引起病死鹅肝脏表面出现大量针尖大、白色坏死点的致病菌。[方法]取肝涂片镜检,然后进行瑞氏-吉姆萨染色。用普通肉汤培养基和鲜血培养基进行分离和纯化,然后用巴氏杆菌特异性引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆至PMD18-T载体上,送至生物公司进行测序。[结果]序列同源性分析表明,分离菌与多杀性禽巴氏杆菌的相似性为99%,结合生化试验结果确定其为多杀性巴氏杆菌。[结论]研究可为鹅巴氏杆菌病的防治提供依据。

关键词： 多杀性巴氏杆菌 分离 鉴定

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2012年—2015年安徽省H9N2禽流感病毒抗原变化分析

胡晓苗; 张丹俊; 戴银; 赵瑞宏; 潘孝成; 周学利; 侯宏艳; 沈学怀; 朱传明; 《动物医学进展 》 2018 北大核心

摘要：为探讨近年来H9N2禽流感病毒流行毒株抗原的变化情况,对2012年—2015年自安徽省分离的24株H9N2亚型禽流感病毒流行株的HA基因进行测序,研究其进化规律。取1株与疫苗株F98遗传距离最远的流行毒株A/chicken/Anhui/20150416/2015,进行交叉免疫保护试验。结果显示,2株灭活苗诱导产生的抗体对异源病毒的中和效价要低1个～2个滴度,并且不能完全阻断异源H9N2禽流感病毒的排毒,表明两者之间存在抗原差异。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒 抗原变化 免疫保护

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鸭源新城疫病毒的分离与鉴定

胡晓苗; 戴银; 张丹俊; 赵瑞宏; 潘孝成; 周学利; 侯宏艳; 沈学怀; 朱传明; 《安徽农业科学 》 2017

摘要：[目的]分离并鉴定鸭源新城疫病毒。[方法]从安徽地区鸭病料中分离新城疫病毒,测定其鸡胚半数感染量(EID_(50))、鸡胚平均致死时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)。[结果]2株新城疫病毒均为强毒。通过RT-PCR技术对这2株鸭新城疫病毒的F基因进行序列测定与分析,结果发现F基因裂解位点为~(112)RRQKRF~(117),符合NDV强毒株裂解位点氨基酸序列。F基因遗传进化树分析发现,AH1株属于基因Ⅶ型,而AH2株属于基因Ⅵ型,来源于鸽源病毒。[结论]水禽新城疫病毒(NDV)的感染来源复杂,应避免将不同种类的家禽混合饲养。

关键词： 鸭 新城疫病毒 分离 鉴定 F基因

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H9N2亚型禽流感疫苗株的筛选

胡晓苗; 张丹俊; 戴银; 赵瑞宏; 潘孝成; 周学利; 侯宏艳; 沈学怀; 朱传明; 《中国兽医杂志 》 2017 北大核心

摘要：为了筛选免疫原性更好的H9N2亚型禽流感病毒疫苗株。本研究在分析H9N2病毒HA基因遗传进化规律基础上,对预选的毒株进行血凝效价(HA)、鸡胚半数感染量(EID50)测定及交叉血凝抑制试验,筛选出疫苗用毒株进行免疫攻毒保护试验。结果显示,CK/AH/AJ3/15株HA效价达11 log2、EID50值为9.17 log10/0.1 mL,有很好的繁殖能力;对当前流行株的HI反应效价比疫苗株F/98高2-3个滴度;以CK/AH/AJ3/15株制作灭活疫苗,整体保护率达到97.5%,比F/98疫苗株的85%明显提高。表明CK/AH/AJ3/15株可以作为H9N2亚型禽流感新型疫苗株的候选株。

关键词： H9N2亚型禽流感病毒 疫苗 筛选

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一株鸭源枯草芽胞杆菌的分离鉴定及药敏试验

胡晓苗; 张丹俊; 戴银; 赵瑞宏; 潘孝成; 周学利; 侯宏艳; 沈学怀; 朱传明; 《畜牧与饲料科学 》 2017

摘要：为了鉴定从患鸭疫里默氏杆菌病鸭脑组织中分离到的混合感染细菌,采用常规方法观察分离菌株的菌落形态、革兰染色特征、生化反应特点,采用细菌16S rDNA PCR及序列分析方法对分离菌株进行分子生物学鉴定。结果表明,分离菌株在胰蛋白大豆肉汤培养基上形成边缘不规则,凸起,表面灰白色,粗糙的大菌落;镜检呈革兰阳性杆菌,能够产生芽胞;在兔血平板上生长时出现明显的β溶血环;生化反应特点与枯草芽胞杆菌模式株基本相符,但略有不同;其16S rDNA序列与GenBank中已经报道的枯草芽胞杆菌16S rDNA序列的相似性达到99%,最终确定分离菌株为枯草芽胞杆菌;分离菌株对红霉素、万古霉素、阿莫西林等抗菌药物敏感,对克林霉素和多西环素中等敏感,仅对头孢噻肟耐药。研究结果为临床治疗由鸭疫里默氏杆菌和枯草芽胞杆菌引起的混合感染提供了科学用药方案。

关键词： 枯草芽胞杆菌 混合感染 表型鉴定 分子生物学鉴定 药敏试验

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鸡疑似克雷伯氏杆菌病的诊断与药敏试验

胡晓苗; 张丹俊; 戴银; 赵瑞宏; 潘孝成; 周学利; 侯宏艳; 沈学怀; 朱传明; 《安徽农业科学 》 2017

摘要：[目的]诊断疑似患有克雷伯氏杆菌病的发病鸡群。[方法]通过采取病鸡肝脏和脑组织,接种于胰蛋白胨琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、SS琼脂培养基、兔血琼脂培养基,培养出疑似克雷伯氏杆菌菌落,革兰氏染色发现该菌属于革兰氏阴性菌,将菌落进行溶血试验和生化试验。[结果]初步判断该菌为克雷伯氏杆菌。药敏试验中发现该菌对庆大霉素、妥布霉素、恩诺沙星、阿米卡星表现较敏感;对阿莫西林、卡那霉素、氨苄西林、头孢噻肟、头孢曲松、多黏菌素、四环素有极强的耐药性;对于红霉素、新霉素的敏感性介于两者之间。[结论]药敏试验为治疗该菌提供了大致方向,同时提醒抗生素类药物切不可滥用,以免产生耐药性。

关键词： 克雷伯氏杆菌 生化试验 药敏

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鹅源鸭疫里默菌的分离鉴定与药敏试验

胡晓苗; 戴银; 沈学怀; 赵瑞宏; 侯宏艳; 潘孝成; 周学利; 张丹俊; 朱传明; 《中国兽医杂志 》 2015 北大核心

摘要：鹅传染性浆膜炎是由鸭疫里默菌(Riemerella anatipesifer,RA)引起鹅的以纤维蛋白渗出并在脏器表面沉积,胸、腹腔大量积液为特征的一种接触传染性疾病,其特征是纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、干酪型输卵管炎和脑膜炎。2~8周龄鹅多发,发病率90%,死亡率10%~40%,给养鹅业造成很大经济损失。国内有关鹅传染性浆膜炎研究比较少,胡清海"~([1])研究表明,2株鹅源RA分离株对

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PCR法检测活毒疫苗中禽白血病病毒污染

胡晓苗; 沈学怀; 戴银; 赵瑞宏; 侯宏艳; 潘孝成; 周学利; 张丹俊; 朱传明; 《中国兽医杂志 》 2014 北大核心

摘要：为调查活毒疫苗中禽白血病病毒(ALV)污染情况,随机抽取安徽省鸡群使用的国内外公司(国内7家、国外1家)活毒疫苗(5个品种),先针对ALV各亚群保守的pol基因设计一对引物进行PCR检测,进一步针对env基因设计2对特异性引物,进行ALV J亚型和A~E亚型PCR检测。pol基因结果为鸡传染性囊病病毒(IBDV)B87株国内7个公司为阳性,鸡痘(AP)、鸡传染性喉气管炎(ILT)某国外公司为阳性,鸡新城疫(ND)LaSota株国内某公司为阳性。env基因结果为IBDV-B87株(国内某公司)和AP为J亚型阳性,ILT、ND-LaSota株和IBDV-B87株(国内另6个公司)为A~E亚型阳性。本研究共检测疫苗120份,ALV检出率达28.57%。因此,使用PCR法可作为活毒疫苗中ALV污染检测的有效方法,同时可以进一步鉴定污染的ALV是J亚型或A~E亚型。

关键词： 活毒疫苗 禽白血病病毒 污染 检测

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活毒疫苗中禽白血病病毒污染的检测方法探讨

胡晓苗; 张丹俊; 侯宏艳; 戴银; 赵瑞宏; 潘孝成; 周学利; 沈学怀; 朱传明; 《安徽农业科学 》 2013 北大核心

摘要：[目的]探讨活毒疫苗中禽白血病病毒污染的检测方法。[方法]随机抽取安徽省鸡群使用的国内外活毒疫苗,使用对禽白血病病毒(ALV)群特异性p27抗原ELISA检测试剂盒进行检测,同时根据禽白血病病毒各亚群保守的pol基因设计引物,进行PCR检测。[结果]7个国内公司鸡传染性法氏囊B87株检测结果均为阳性,某国外公司鸡痘、鸡传染性喉气管炎检测结果呈阳性,某国内公司为阳性。鸡新城疫lasota株共检测疫苗35份,检出率达28.57%。ELISA检测结果与PCR结果相一致。[结论]使用p27抗原ELISA检测试剂盒和PCR法均可作为活毒疫苗中ALV污染检测的有效方法,说明活毒疫苗中ALV污染是ALV传播的重要因素。

关键词： 活毒疫苗 禽白血病病毒 污染 检测

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